水解胶原的测定及应用

背景及概述^[1][2]

水解胶原又叫水解胶原蛋白。水解胶原蛋白是一种新型胶原蛋白类产品，是以胶原蛋白或富含胶原蛋白的资源为原料进行生产的。它除了具有胶原蛋白的特征氨基酸组成(总氨基酸残基的大约30％为甘氨酸，另有15-30％的在其他蛋白质中含量很少的两种氨基酸，脯氨酸和4-羟脯氨酸)之外，还具有分子量较小，组成成分中以分子量低于3000 的小肽为主的特点。这使得水解胶原蛋白更易于透过表皮直接被真皮吸收，更易于通过消化道被消化吸收，在护肤品、美容保健品等领域具有广泛的用途，深受消费者的欢迎。

制备^[1]

取1000g三矾腌制处理的市售麻蜇，沥水后，浸没于2-5倍量的去离子水中浸泡，并每2-3小时换一次水， 直至浸泡水中氯化钠的含量低于1.5ppm为止(氯离子检测呈阴性)。浸泡后的脱盐霞水母调节pH至5.8-6.8 (一种专用复合胶原蛋白酶的最适pH)，在38-40℃(该胶原蛋白酶的最适温度)下保温消化12-16小时，得到一澄清透明的液体，即为水解胶原蛋白液；水解胶原蛋白液冷冻干燥，得到20g纯度达到95％以上，分子量在3000以下的肽类占85％以上的水解胶原蛋白粉固体。

测定^[2]

一种水解胶原蛋白口服液中多肽分子量的快速测定方法，包括以下步骤：

(1)制备检测样品：取市售水解胶原蛋白口服液10ml，水解胶原蛋白的质量浓度为105g/L，加入200μL去离子水搅拌均匀，再加入5ml的0.1mol/L的Tris-HCL缓冲液，2ml的2,5-二羟基苯甲酸搅拌离心处理后用滤膜进行次粗滤，得到滤液；

(2)将所得滤液通过特制的凝胶层析柱，经与分子量已知的标准品在相同条件下通过凝胶层析柱来计算待测样品的分子量，计算公式为：Ve＝k-klogMr，其中，Ve为洗脱体积，k和k为常系数，Mr为分子量。

其中，通过所述标准品的洗脱体积和分子量计算出常系数k和k，再结合待测样品的洗脱体积套用到公式里计算其分子量；所述Tris-HCL缓冲液中还有含质量浓度为0.02mol/L的LHAC；所述(2)中滤液在通过特制的凝胶层析柱前可将滤液中加入胃蛋白酶，加酶量为滤液的3％，5℃下搅拌均匀后静置8h，灭酶活后离心处理30min，取上清液，可对口服液中的胶原蛋白多肽进行进一步提纯，增加检测结果的准确性；所述标准品为牛血清蛋白；所述特制的凝胶层析柱是将交联葡聚糖、生物胶-P和蔗渣以1:2：0.015的质量比混合后在无盐水中溶胀20h，先用搅拌棒持续搅拌2h，使三者充分混合均匀，再每两小时间歇搅拌，所述搅拌棒为加热搅拌棒，可加快凝胶的溶胀，等其完全溶胀真空抽滤脱气后即可装柱；所述蔗渣经超纤维化处理，可增加凝胶的孔隙稳定性及其分布均匀性，同时可保证其具有足够的机械强度。

应用^[3-4]

一种水解胶原蛋白-无机金属盐直接处理造纸废水的方法，取一定量造纸废水，向其中直接加入一定量的水解胶原蛋白粉和无机金属盐，调节温度和搅拌时间处理造纸废水。该方法对造纸废水的CODcr的单独去除率达29%，色度的去除率高达76%。本发明选择利用一定分子量的水解胶原蛋白与无机金属盐直接加入到造纸废水中，在络合得到絮凝剂的同时产生絮凝作用，伴随着造纸废水中细小纤维及颗粒的沉淀，即絮凝剂形成的同时实现废水处理目的，水解胶原蛋白和无机金属离子反应制取絮凝剂乳液，干燥后再加药处理废水的过程。本方法用于造纸废水处理效果明显，不用作大量工作，降低成本，且操作简单，易于造纸废水处理厂操作使用。

CN201510705052.3公开的硅烷偶联剂交联水解胶原蛋白制备木材胶黏剂的方法，该方法是先将10份水解胶原蛋白(分子量1000~3000Da)与50~100份去离子水加入到反应釜中，常温搅拌10min溶解，得到混合均匀的溶液，调节pH至7.0~10.0，温度30~60℃。在上述水解胶原蛋白液中加入1.5~3份硅烷偶联剂与0~2份双官能团醛进行反应，继续搅拌反应8~12h，即可获得水解胶原蛋白基胶黏剂。利用硅烷偶联剂交联后的水解胶原蛋白作为木材胶黏剂，提高了其耐水性和粘接强度。本发明工序少，操作简单，易于工业化生产。

主要参考资料

[1] CN200710041128.2 一种以霞水母为原料制备水解胶原蛋白的工艺

[2] CN201610968782.7 一种水解胶原蛋白口服液中多肽分子量的快速测定方法

[3] CN201310554263.2一种水解胶原蛋白-无机金属盐直接处理造纸废水的方法

[4] CN201510705052.3一种以水解胶原蛋白为原料的木材胶黏剂的制备方法