考马斯亮蓝快速染色液的用法

介绍

考马斯亮蓝快速染色液(Coomassie Blue Fast Staining Solution)是以考马斯亮蓝G250为染料，可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白凝胶的无污染、快速、高灵敏染色，或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。18分钟即可检测到100ng条带，约40分钟可检测到10ng条带，约50分钟即可获得背景非常低的凝胶染色，约150分钟即可获得几乎完美的无背景染色的蛋白条带。

操作步骤

1 电泳结束后，切取少量含有MARK蛋白以及少许样品的小部分凝 胶进行染色，其余部分用保鲜膜包好，放在4℃冰箱保存。 取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝胶。置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时 间。 注：具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚， 温度较低，则染色时间宜适当延长。凝胶较薄，温度较高，则染色时 间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近， 在染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。染色2-4 个小 时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。

2 倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2-3 次。

3 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色 4-24 小时。期间更换脱色液2-4 次，直至蓝色背景基本上全部被脱去，并且蛋白条带染 色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色1-2 小时后即可出现。 注：脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸，可以使部分染料吸附 在吸水纸上，加快脱色。脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。

4 完成脱色后，用ddH2O浸泡，至于未染色凝胶长度相等时，参照 MARK 蛋白，与未染色凝胶对比，切下所需蛋白成分的凝胶，收集起来。然后把所要提纯的蛋白从凝胶中分离出来。

常见问题

1、无染色条带:可能上样量太少，建议电泳时加适当量的BSA等作为阳性对照。

2、背景太高:可能杂质没有除尽，建议延长最初的蒸馏水洗涤时间或增加洗涤次数。也可以在完成染色后，把凝胶放置在蒸馏水中在室温或4℃进行洗涤。在4℃蒸馏水中浸泡一段时间，通常可以取得较好的脱色效果。

3、染色条带的灵敏度不够理想:可以使用考马斯亮蓝快速染色液进行重复染色，重复染色可以改善染色效果。在加热情况下染色可以显著提高检测灵敏度，另外染色后在室温或4℃用蒸馏水进行脱色也可以显著改善染色的灵敏度。

4. 考马斯亮蓝沾到皮肤：考马斯亮蓝和皮肤中蛋白质通过范德华力结合，反应快速，并且稳定，无法用普通试剂洗掉。待一两周左右，皮屑细胞自然衰老脱落即可无碍。