胰蛋白酶抑制剂的作用与活性测定

什么是胰蛋白酶抑制剂？

胰蛋白酶抑制剂（BBI）是对胰蛋白酶有抑制活性的蛋白质，存在于豆奶等许多豆制品中，具有较好的抗炎功效。它能够与胰蛋白酶结合，从而阻止其水解蛋白质分子结构中的肽键，进而影响消化功能的一种药物。临床上主要用于治疗急性胰腺炎、慢性胰腺炎等疾病。口服BBI即显示出良好的免疫调节作用，对自身免疫性疾病有较好的潜在治疗效果。研究表明BBI能显著地激活巨噬细胞内抗病毒天然免疫，从而抑制人类免疫缺陷病毒（HIV-1）的感染和复制。

大豆中胰蛋白酶抑制剂的活性测定

检测原理

胰蛋白酶可作用于其底物苯甲酰-L精氨酰-对硝基 苯胺(BAPNA)，使BAPNA发生水解，生成苯甲酰- L-精氨酸和淡茶色的对硝基苯胺，使溶液变成淡茶色。对硝基苯胺在 410 nm下有特征吸收。大豆制品中的胰蛋白酶抑制剂可抑制此反应，使吸光度值下降，其下降程度与 胰蛋白酶抑制活性成正比。 采用分光光度计在410 nm 处测定该反应前后的吸光度值，可定量分析胰蛋白酶抑制剂活性。

检测方法

按表2分别吸取一定量的四种溶液分别加入至四个10 mL离心管中。 每一样品的试样稀释液均需准备相应的空白溶液。样品提取液和相应的空白溶液在测定过程中应同时进行操作（包括离心步骤）。

表 2 胰蛋白酶抑制剂活性测定时各溶液加入量  (单位：mL)

（1）用涡旋振荡器混匀离心管中的溶液，并置于37 C恒温水浴锅中，保温10 min。

（2）在四个离心管中各加入1 mL胰蛋白酶使用液。用涡旋振荡器将管内溶液混匀后，将试管 放回到恒温水浴锅中。在37 C水浴中保温10 min±5 s后，在标准试管中和样品管中加入1 mL 乙酸溶液，混匀。

（3）将离心管置于离心机中，以4 000 r/min速度离心10 min。

（4）采用可见分光光度计，于410 nm波长，用10 mm比色皿，以水调零，测定上清液的吸光度。 该溶液可在2 h内保持稳定。