HEPES缓冲液的配制和应用

HEPES是用于生物研究的常用通用缓冲液之一，主要成分是羟乙基哌嗪乙硫磺酸，外观为白色结晶粉末。在生理pH下，该分子是两性离子的，并在pH 6.8至8.2下可有效作为缓冲剂。HEPES广泛应用于多种生物化学反应，并在某些细胞培养基中用作缓冲试剂。

配制方法

①　HEPES缓冲液可按需要的浓度立即添加到配置的培养液中，再过滤除菌。每1000ml培养液中添加2.38克HEPES，待溶后用1N NaOH调pH至7.2，滤过除菌后应用，这时HEPES的应用浓度为10mmol/L。

②　也可以配出100x贮存液（1mol/L），应用前取99ml培养液添加1ml贮存液，最后运用浓度仍为10mmol/L。1mol/L（100x）HEPES缓冲液配置方式：取23.8gHEPES溶解90ml双蒸水中，用1N NaOH调pH至7.5-8.0，随后用水滴定剂至100ml，过滤除菌，散装瓶子（2ml/瓶），4摄氏度保存。可以根据实际情况的需求按照配比以同样的方式配制缓冲液。

应用

HEPES缓冲液，很多时候作为有机化工中的离子缓冲剂和医药中间体，也用于细胞的培养，这可延伸到体外受精和胚胎培养，因为它的分解能力可随着温度的升高而增强，随着温度的降低而减弱，但与其他缓冲剂相比，低温时它可较好的保持酶的结构和功能。

HEPES缓冲液暴露于光线中时，会产生过氧化氢，对培养的细胞或其它有生物活性的物体产生毒性，因此HEPES作为缓冲液的操作应尽量在避光条件下进行。