桤木酮的制备

背景及概述^[1][2]

桤木酮（Alnustone）为淡黄色针晶，mp.63‑63.5℃。其主要存在于桦木科植物垂桤木Alnus pendula的花、姜科植物草豆蔻Alpinia katsumadai Hayata的种子以及黄根姜黄Curcuma xanthorrhiza Roxb.的根茎中。药理研究表明，桤木酮具有抗炎作用，对角叉菜胶诱导的大鼠后爪肿胀有显著抗炎作用。

制备^{[1] [2]}

 一种桤木酮的提纯方法，其特征在于包括以下步骤：取垂桤木药材冷冻干燥，粉碎之后投入超临界萃取罐内，通入CO₂，以无水乙醇为夹带剂，在萃取压力28‑42MPa，温度40‑50℃条件下动态萃取1‑3h，分离釜压力为5‑7MPa，温度为46‑60℃，收集萃取物，加入聚酰胺树脂柱，正己烷‑甲醇洗脱，收集洗脱液减压浓缩，浓缩液用乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩至小体积，静置析晶，结晶物用正己烷‑丙酮重结晶，冷冻干燥即得桤木酮。

举例：

将垂桤木花粉碎成20目粗粉，取10kg投入超临界萃取罐内，加入0.7kg无水乙醇作为夹带剂，在萃取压力28.5MPa、萃取温度40℃、CO₂流量15L/h的条件下萃取1.5小时；控制分离釜的压力为5MPa、温度48℃，分离得萃取物；将萃取物与少量聚酰胺树脂拌样后，挥干溶剂，上聚酰胺树脂柱，按正己烷‑甲醇体积比10:1‑1:1进行梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集桤木酮洗脱液，洗脱液减压浓缩得到浓缩液，浓缩液用等体积的乙酸乙酯萃取3次，将萃取液减压回收试剂至有结晶物析出，冷却、静置析晶，滤出结晶物，将结晶物再用正己烷‑丙酮加热回流溶解重结晶，冷冻干燥即得桤木酮，经高效液相检测，含量95.3%。

本方法采用超临界CO₂萃取，提取率高，无污染，周期短，杂质溶出少，减少了有机试剂用量；采用聚酰胺树脂树脂分离，正己烷‑甲醇梯度分离，操作简单，分离效果好。

含量测定^[2]

 一种草豆蔻中桤木酮的含量测定方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：

分别称取3批草豆蔻干燥药材，用粉碎机粉碎(过3号筛)，得药材细粉末，置密封袋于干燥器中保存备用。精密称取药材细粉约1.0g，放入已知重量的250ml锥形瓶中，依次精密加入甲醇溶剂(分析纯)100ml和咖啡因内标储备液5ml，称重，记录溶剂总重量，盖紧瓶塞并用 锡箔纸和封口膜包裹，置于超声清洗器中超声30min，放冷称重，用甲醇溶剂补足损失重量，过滤，取溶剂总体积一半的续滤液置于旋蒸瓶中，于45℃旋蒸挥干溶剂，用甲醇复溶，用有机系0.22μm微孔滤膜过滤，取滤液置50ml容量瓶中定容，即得供试品溶液；

(2)对照品及内标储备溶液的制备：

分别称取桤木酮对照品约0.02g和咖啡因标准品(内标)约0.02g，精密称定，置100ml烧 杯中，加甲醇(色谱纯)20ml溶解，置50ml容量瓶加甲醇(色谱纯)定容，即得对照品储备溶液 (394.0g/ml)和内标储备溶液(388.0g/ml)；

(3)GC-MS条件：

GC条件：SH-Rxi-5Sil MS色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm，日本岛津公司)；程序升温，起始温度100℃，保持3min，以30℃/min升至260℃，保持6min，再以10℃/min升至280℃，保持 6min；载气(He)总流速20mL/min，柱流速2.35ml/min，压力165.7kPa；分流比30:1；进样口温 度250℃；进样体积1μl；

MS条件：接口温度270℃；电子轰击(EI)离子源；电子能量70eV；离子源温度200℃；溶剂切除时间2.5min；数据采集方式SIM模式，SIM条件为“分组1：采集时间9～12min；每个质量 数扫描时间0.2s；质量数选择194、109、165。分组2：采集时间14～18min；每个质量数扫描时间0.2s；质量数选择262、171、157、128”；

(4)建立回归方程：

精密量取对照品储备液适量，甲醇稀释，分别加入等量内标溶液，得到一系列浓度的含等量内标的对照品溶液，最终稀释倍数分别为对照品储备液的4、8、10、16、20、40、80和160 倍(均含19.4μg/ml咖啡因)，进样体积1μl；以对照品与咖啡因峰面积比值(Y)为纵坐标，对 照品溶液的进样量(X)为横坐标，建立回归方程；

(5)试样中桤木酮的含量测定：

将试样进样，根据样品的峰面积，代入上述回归方程，分别计算得出试样中桤木酮的含量。

主要参考资料

[1] CN201210120863.3 一种桤木酮的提纯方法

[2] CN201810526824.0 草豆蔻中桤木酮的含量测定方法