羧肽酶B的用途与制备

羧肽酶B(简称CPB)是一种含锌的胰外肽酶。CPB含307个氨基酸，分子质量35ku。由于CPB特异的水解肽链C端的碱性氨基酸(精氨酸，赖氨酸或鸟氨酸)，所以其可用于蛋白质和多肽的序列分析，特别是用来确定羧基端氨基酸。此外，目前CPB的主要商业用途是作为工业用酶应用于胰岛素的工业生产。

制备方法

CN1990861A目的在于，提供一种通过直接表达CPB来制备活性CPB的方法，以此克服现有技术中存在的步骤繁琐之缺陷。

本发明所说的活性羧肽酶B(CPB)的制备方法，其主要步骤为：首先经上清表达或包涵体表达带CPB的DNA的重组菌株，然后经分离得到活性CPB，其特征在于，所述重组菌株的质粒为pT7-473-CPB，宿主为E coli BL21(DE3)(BL21(DE3)：F-，ompT，HsdSB，(rB -，mB -)，dcm，gal，λ(DE3)购自invitrogen公司。

本发明所说的质粒(pT7-473-CPB)的构建：在pT7-473(来源于pET-21a(invitrogen出品)，增加多克隆位点后命名，增加多克隆位点的方法(参照Molecular Cloning：A LaboratoryManual 2nd ed(Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)的多克隆位点NdeI和HindIII之间插入CPB的编码DNA片段，该质粒为T7启动子，含Lac调节元件，氨苄抗性。其结构如图2所示。

其中：CPB的DNA片段来源于已构建的质粒pT7-473-proCPB，proCPB核苷酸序列来源于RT-PCR技术获得的大鼠胰腺proCPB RNA序列(Su-Xia Li等，Protein and Peptide Letters2003，10(6)：1-10)。

本发明实现了通过直接表达CPB来制备活性CPB的目的，克服了现有技术中存在的步骤冗杂之缺陷。