雪胆甲素的应用

背景及概述^[1-2]

雪胆，别名金龟莲、金盆，为葫芦科植物雪胆(Hemsleyaamabilis Diels)及其同属数种植物的干燥块根，秋末叶黄时采挖，除去泥沙，切片，干燥。本品性苦、寒，入胃、大肠二经，具有清热解毒，抗菌消炎的功效。

雪胆属植物全世界有31种，除2种产于印度、越南外，主要分布于我国云、贵、川三省，有眉雪胆(H emiensis)、彭县雪胆(Hpengxianensis)、圆果雪胆(Hamabilis)、长果雪胆(Hdolichocarpa)、小花雪胆[Hgraciliflora]、巨花雪胆(H gigantha)等，该属中多种植物为常用中药。雪胆属植物大多富含雪胆甲素(含量高达6.018 mg·g )、雪胆乙素、雪胆皂苷等。其中雪胆甲素为23，24-双氢葫芦素F-25-乙酸酯(23，24-dihydroxycucurbitacin F-25-acetate)。

结构

应用^[3]

1. 抑菌作用 

雪胆素抗菌作用显著，浓度为0.1 mg·mL 时，对福氏痢疾杆菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌等有不同程度的抑制作用；较相同浓度的氯霉素强 。建立雪胆中雪胆甲素反相高效液相色谱含量测定法，并对其抗菌机制进行了研究，实验发现雪胆中雪胆甲素的含量为(5.3±0.4)mg·g，雪胆甲素通过抑制葡萄球菌细胞壁的合成发挥主要抑菌作用。

2. 抗肿瘤作用

研究雪胆甲素体内外对肿瘤细胞的抑制作用，雪胆甲素诱导丝状肌动蛋白的不可逆聚集，增加G/M期细胞数量，抑制细胞循环。雪胆甲素导致磷酸化组蛋白H 的减少，同时显著增强ADP核糖聚合酶的分裂。研究发现雪胆甲素能够破坏肌动蛋白细胞骨架，通过抑制JAK2/STAT3下游生存素的生成诱导细胞凋亡。

高申等 以不同浓度的雪胆甲素作用于A549细胞和小鼠原代培养的脾细胞，采用MTI"法检测雪胆甲素对两种细胞增殖的影响，流式细胞术及Annexin V-PE细胞凋亡试剂盒检测雪胆甲素A549细胞细胞周期及凋亡的影响。研究表明雪胆甲素对A549细胞和小鼠原代脾细胞的增殖均有抑制作用，且呈浓度依赖性；雪胆甲素可将大部分A549细胞阻滞于Go/G 和S期，少部分细胞阻于G 和M期，并可促进细胞凋亡。

3. 体外抗HIV活性Tian等 叫应用合胞体抑制实验、

p24抗原产生的抑制实验、慢性感染细胞和正常细胞间的细胞融合抑制实验等检测雪胆甲素、雪胆乙素的体外抗HIV-1活性；利用HIV-1逆转录酶、蛋白酶抑制实验，NC07锌离子逐出实验探讨其作用机制。

结果显示雪胆甲素、雪胆乙素抑制HIV-1诱导合胞体形成的半效应浓度分别为3.09 g·mL～、2.53 g·mL；抑制HIV-1急性感染的C8166细胞p24抗原产生的半效应浓度分别为3.97 g·mL、18.90 g·mL；抑制慢性感染H9与正常C8166细胞融合的EC50分别为1.76 I.Lg·mL、11.95 g·mL。此外，雪胆甲素、雪胆乙素对HIV-1反转录酶、蛋白酶，NC07 锌离子逐出均无抑制作用；在共培养实验中，雪胆甲素、雪胆乙素预处理的C8166细胞组比未经预处理细胞组更有效的抑制HIV-1活性。

4. 对实验性胃溃疡的保护作用 

采用大鼠应激性胃溃疡、幽门结扎性胃溃疡、醋酸致胃溃疡等模型观察雪胆提取物抗胃溃疡作用、对正常大鼠胃液分泌的影响。研究发现雪胆提取物能使大鼠实验性胃溃疡的溃疡面积缩小，溃疡指数降低；能减少大鼠胃液分泌，降低胃酸度及胃蛋白酶活性。

制备 ^[1-2]

方法1；一种高效性和选择性、产率高、纯度高、低污染的制备方法。按照下列步骤进行：将干燥的雪胆药材粉碎，过20~60目筛；取一定量的药材粉末加入料液比为1：3~6倍、60%~95%的乙醇溶剂，并同时加入粉末重量0.1%~0.5%的生物酶在pH值4~5，温度为45~50℃的条件下酶解1~3h；酶解完成后，将酶解物在温度为50~60℃的条件下微波提取300~900s，过滤，滤液减压浓缩至无醇味，收集浓缩液备用。

将浓缩液首先在温度为20~40℃的条件下，用0.4微米的陶瓷膜分离出粗提液里面的蛋白质、多糖、鞣质等物质，再将所得到的提取液上聚酰胺层析柱先用2~4倍柱体积的水洗脱，再用3~5倍柱体积、60~80%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；乙醇洗脱液减压浓缩至原体积的1/5~1/2，静置，让其在冰水浴中冷却结晶，得粗结晶样品；将粗结晶样品溶解于热水中，煮沸，冷却，加入质量体积比为1：50~70的雪胆甲素晶种，搅拌的条件下，在冰水浴中重结晶1~3次，过滤，收集结晶物即得雪胆甲素。

方法2：参照国家医药管理局的提取方法并加以改进：取雪胆块根，粉碎(过60目筛)，加95％ 乙醇，加热回流浸煮，反复6～7次，每次2h。合并溶液，过滤，减压蒸发，回收乙醇，得糖浆状乙醇浓缩物，先加适量热水稀释，石油醚脱脂，无水硫酸钠破乳，再加适量乙酸乙酯提取，反复6～7次，合并乙酸乙酯溶液，用水洗涤两次后，弃去水层，旋转蒸发回收乙酸乙酯，得糖浆状乙酸乙酯浓缩物，在常温下静置过夜，使结晶析出，过滤，得雪胆甲素粗品。

母液经浓缩、处理如前可再得粗品。雪胆甲素粗品，加适量丙酮，加热回流溶解后，再加热蒸发回收丙酮，浓缩至适当浓度时，趁热过滤，在常温下静置使析出结晶，预冷丙酮洗涤， 过滤，挥干丙酮，即得雪胆甲素精品。

主要参考资料

[1] CN201510265074.2 一种从雪胆中提取雪胆甲素的方法

[2] 雪胆甲素的提取与确证

[3] 雪胆素的研究进展