RCC4 人肾癌细胞系的应用

背景^[1-3]

RCC4人肾癌细胞系是一种来源于人肾癌的细胞系，具有多种生物学特性和功能。以下是一些关于RCC4人肾癌细胞系的信息：

来源：RCC4人肾癌细胞系最初由Dr.J.A.Hartwell于1982年从一名患有肾癌的男性患者的肿瘤组织中分离出来。

培养条件：RCC4人肾癌细胞系通常在DMEM(高糖)培养基中培养，添加10%胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素。细胞生长在37°C、5%CO2的恒温培养箱中。

生物学特性：RCC4人肾癌细胞系具有较高的增殖能力和较强的侵袭性，可用于研究肾癌的发生、发展和转移机制。此外，RCC4细胞系还被广泛用于药物筛选和毒性评估实验中。

基因表达：RCC4人肾癌细胞系表达一些与肾癌相关的基因，如KRAS、NRAS、BRAF、TP53、SMAD4等。这些基因突变在肾癌的发生和发展中起着重要作用。

应用：RCC4人肾癌细胞系已经被广泛应用于肾癌的基础研究、药物研发和临床前研究中。例如，它可以用于研究肿瘤生长、转移和耐药性等生物学特性；也可以用于筛选新的抗癌药物和评估其疗效和安全性。

RCC4人肾癌细胞系

RCC4人肾癌细胞系培养操作

1)复苏RCC4人肾癌细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)RCC4人肾癌细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)RCC4人肾癌细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

RCC4人肾癌细胞系可以用于自噬联合mTOR通路或磷酸戊糖途径双重抑制对肾细胞癌治疗的研究

自噬联合磷酸戊糖途径双重抑制对肾癌细胞的作用及其机制目的：探索以RCC4为代表的具有高mTOR、高自噬水平肾癌细胞在抑制自噬后代谢通路的变化,并研究针对该代谢通路以及自噬双重抑制后对此类肾癌细胞的治疗作用。

方法：为探索RCC4肾癌细胞在自噬抑制剂作用下代谢通路的改变,我们对氯喹和对照剂(DMSO)处理后的RCC4人肾癌细胞系进行了代谢谱分析。通过对结果进行代谢组富集分析(Metabolite Set Enrichment Analysis,MSEA),拟发现治疗组与对照组见差异最大的代谢通路改变,并通过给予RCC4人肾癌细胞系相应的抑制剂后检测细胞,研究氯喹与糖代谢抑制剂是否对RCC4人肾癌细胞系增殖具有协同抑制作用。因肿瘤中自噬及代谢通路的改变与氧化应激关系密切,我们通过检测细胞的氧消耗和营养物消耗评价RCC4人肾癌细胞系在自噬被抑制后代谢的改变。

同时,通过对pNFxB的分析进一步了解自噬与代谢双重抑制对RCC4人肾癌细胞系产生抑制的可能机制。结果：RCC4肾癌细胞在应用氯喹前后代谢通路具有明显变化,其中磷酸戊糖途径(PPP)的变化最为明显。PPP途径活性在RCC4人肾癌细胞系自噬被抑制后明显升高,而其代谢产物的含量也显著增多。应用PPP途径抑制剂6-氨基烟酰胺(6AN)后,RCC4人肾癌细胞系的增殖受抑制,而氯喹显著增加了RCC4人肾癌细胞系对6AN治疗的敏感性。氯喹与6AN对RCC4人肾癌细胞系具有协同性抑制作用。RCC4人肾癌细胞系的自噬被抑制后,其对葡萄糖的摄取明显增多,而乳酸升高不明显,提示糖酵解并不是其糖代谢改变的主要途径,同时,PPP途径代谢产物在氯喹实验组显著更高。通过对pNF(?)B的分析,我们发现氯喹和6AN均使RCC4人肾癌细胞系中pNF(?)B增加,可能通过炎性体(Inflammasome)途径抑制RCC4人肾癌细胞系增殖。

结论：RCC4肾癌细胞具有高mTOR、高自噬水平的特点,其对氯喹联合雷帕霉素治疗敏感性较低。通过对氯喹处理前后RCC4人肾癌细胞系的代谢谱分析发现,PPP途径增高可能是其产生抵抗的机制。联合应用氯喹和PPP抑制剂6-AN可对RCC4人肾癌细胞系产生协同抑制作用,同时,氯喹和6 AN均使细胞内NFxB水平增高,提示氯喹联合6AN对RCC4人肾癌细胞系增殖的抑制作用可能通过炎性体介导。

参考文献

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