告达庭的主要应用

背景及概述^[1]

白首乌系萝藦科鹅绒藤属植物耳叶牛皮消(Cynanchumauriculatum Royle ex Wight)的干燥块根，是传统的补益中药。研究表明，C-21 甾体苷是白首乌的主要活性成分，具有调节免疫、保护肝脏、神经和胃肠道细胞等药理作用。近来的研究还表明白首乌C-21 甾体苷类成分具有显著的抗肿瘤作用。已有多种具有抗肿瘤作用的C-21 甾体苷类化合物从白首乌中分离得到。其中，告达庭是从白首乌中分离得到的一种C-21 甾体苷元。近期有研究报道告达庭对人胃癌、结肠癌、肺癌等多种人源性肿瘤细胞株的生长具有抑制作用。

应用 ^[1-5]

告达庭对人胃癌、结肠癌、肺癌等多种人源性肿瘤细胞株的生长具有抑制作用。

1）告达庭激活Caspase-3 诱导人胃癌细胞SGC-7901 凋亡：告达庭是从白首乌中分离得到的一种具有较高活性的成分的C-21 甾体苷元，有报道其有抑制消化道肿瘤细胞增殖的作用。实验结果证实告达庭呈剂量、时间依赖性地抑制人胃癌细胞SGC-7901 细胞的生长并能诱导细胞凋亡，使细胞凋亡率增高并出现染色体浓聚等典型的凋亡形态学变化。细胞凋亡主要存在两条通路：线粒体通路和死亡受体通路，两条途径都是一系列高度调控的半胱氨酸蛋白酶Caspase 级联反应(cascade)事件的结果，Caspase-3 被证实处于该级联反应的下游，它通过降解细胞内相应底物使细胞死亡，在细胞凋亡中起着不可替代的作用。以往文献报道告达庭作用肝癌细胞24h 时能明显激活Caspase-3， 通过Caspase途径诱导肿瘤细胞凋亡。因此本实验选择相同时间点对告达庭作用胃癌细胞SGC-7901 的Caspase-3 蛋白表达量和活性进行了检测，结果表明告达庭70 μM 能明显增加剪切型Caspase-3 蛋白（19kD 和17kD）的表达，并使蛋白活性显著增高。综上，实验结果表明告达庭具有抑制胃癌细胞SGC-7901 增殖和诱导胃癌细胞发生凋亡的作用，其机制是通过激活Caspase-3 级联反应诱导胃癌细胞的凋亡。

2）告达庭增强TRAIL诱导的HepG2细胞凋亡。采用MTT法和细胞集落形成实验检测告达庭与TRAIL联合对细胞增殖的影响；TUNEL染色法检测细胞凋亡的变化；免疫印迹实验分析蛋白的表达水平。结果显示告达庭与TRAIL联合作用Hep G2细胞24 h后，细胞活力明显下降，细胞增殖受到抑制；同时，两者联用后细胞凋亡数目明显增加，显著高于告达庭和TRAIL单用诱导的细胞凋亡率；与对照相比，告达庭与TRAIL联用促进了caspase-3、caspase-7、caspase-9和PARP的活性切割，而凋亡抑制蛋白survivin的表达则下调。因此告达庭能够增强TRAIL诱导Hep G2细胞凋亡，其机制可能与激活caspase家族因子的活性切割和抑制survivin的表达相关。

3）告达庭下调β-catenin/survivin抑制神经胶质瘤C6细胞迁移。MTT法检测告达庭对C6细胞存活力的影响；流式细胞术检测细胞周期的变化；细胞划痕实验及Transwell迁移小室检测告达庭对C6细胞体外迁移能力的抑制作用；免疫印迹实验检测告达庭对C6细胞内β-catenin、Survivin以及细胞周期相关蛋白CyclinD1和Cdk4蛋白表达的影响。结果显示告达庭能够剂量依赖性地抑制C6细胞的增殖并阻滞细胞于G1期，其机制与下调细胞周期素CyclinD1和Cdk4的表达相关；告达庭给药后，C6细胞的迁移能力明显受到抑制，同时β-catenin及其下游因子Survivin的表达呈显著下降趋势。因此告达庭具有抑制C6细胞的增殖和体外迁移能力的作用，其机制可能与抑制β-catenin蛋白及Survivin的表达相关。

4）告达庭能逆转HGF诱导的PC-9细胞对吉非替尼的耐药。利用外源性HGF及与MRC-5共培养诱导PC-9细胞对EGFR-TKIs耐药模型；MTT法考察告达庭对HGF诱导的PC-9细胞耐吉非替尼的逆转作用；Western blot检测告达庭联合吉非替尼逆转HGF诱导PC-9细胞耐药的机制。结果显示外源性HGF和MRC-5均可诱导PC-9对吉非替尼的耐药作用，降低相对抑制率(P<0.05)；在HGF存在的情况下，单用告达庭(0~32μM)和吉非替尼(1μM)均不能显著抑制PC-9的增殖，而告达庭联合吉非替尼能剂量依赖性抑制PC-9增殖(P<0.05)。告达庭联合吉非替尼下调Met及PI3K/AKT磷酸化水平(P<0.05)。因此告达庭能逆转HGF诱导的PC-9细胞对吉非替尼的耐药，其机制可能与其抑制Met/PI3K/AKT通路有关。

5）此外，告达庭还可用于制备一种乙酰水杨酸告达庭酯类衍生化合物，该方法包括在脱水剂的作用下，使告达庭与醛或酮类进行反应，生成8，14-O-异亚烷基告达庭；再在催化剂的作用下，使其与乙酰水杨酸衍生物反应，结束后，在酸性条件下脱去保护基，得到最终产物乙酰水杨酸告达庭酯类衍生化合物。上述化合物具有双重靶向作用于肿瘤细胞，实现更好的抗肿瘤效果，且具有原料易得，工艺简单和易于操作的优点，能够用于抗肿瘤药物。

主要参考资料

[1] 告达庭激活Caspase-3诱导人胃癌细胞SGC-7901 凋亡

[2] 告达庭增强TRAIL诱导的HepG2细胞凋亡

[3] 告达庭下调β-catenin/survivin抑制神经胶质瘤C6细胞迁移实验研究

[4] CN201510079985.6一种乙酰水杨酸告达庭酯类衍生化合物及其制备方法和应用

[5] 告达庭联合吉非替尼逆转HGF诱导的非小细胞肺癌对EGFR-TKI的获得性耐药研究