人血管活性肽酶抑制剂(VPI)ELISA 试剂盒的应用

背景^[1-3]

人血管活性肽酶抑制剂(VPI)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中血管活性肽酶抑制剂(VPI)的含量。

人血管活性肽酶抑制剂(VPI)elisa试剂盒实验原理

人血管活性肽酶抑制剂(VPI)ELISA试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人血管活性肽酶抑制剂(VPI)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人血管活性肽酶抑制剂(VPI)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人血管活性肽酶抑制剂(VPI)ELISA试剂盒

样本处理要求

1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果计算

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

应用^[4][5]

用于血管活性肽在血管平滑肌细胞中的表达与调控机制研究

血管活性肽是一类调节血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）舒缩功能、维持血管张力的小分子肽类物质,多数以自分泌、旁分泌方式发挥作用,按其血管效应的不同分为缩血管肽和舒血管肽。前者包括血管紧张素I（Iangiotensin II,Ang II）和内皮素-1（endothelin-1,ET-1）等,后者包括肾上腺髓质素（adrenomedullin,ADM）和心钠素（atrial natriuretic factor,ANF）等。生理条件下,血管舒-缩活性肽的分泌和生物活性处于动态平衡,以保证血管张力的稳态。不同种类的活性肽之间存在着复杂的正反馈或负反馈调节,由此构成一个精细、严密的血管张力调控网络。

由于大多数缩血管活性肽具有强烈的促进VSMC肥大、增殖、迁移的活性,其功能的亢进常常是多种血管重塑性疾病的主要诱因。而舒血管活性肽则具有相反的作用。因此,研究血管活性肽之间形成的复杂网络,阐明该网络对血管功能的调节机制,将有利于深层次了解血管活性肽系统的生理功能和在心血管疾病发生发展中的病理生理学意义。

以Ang II为诱发因素,观察其对VSMC释放ET-1、Ang II、ANF和ADM的影响及相互关系,研究了转录激活蛋白-1（activator protein-1,AP-1）和Janus蛋白酪氨酸激酶-信号转导及转录激活因子途径（janus protein tyrosine kinase-signal transducers and activators of transcription pathway,JAK-STAT pathway）对血管活性肽基因转录激活的作用以及AP-1和信号转导及转录激活因子5（signal transducers and activators of transcription 5,STAT5）在调节基因转录过程中的相互关系,以期揭示Ang II对4种血管活性肽相对水平调节的分子机制。

1血管舒-缩肽在血管平滑肌细胞中的表达与调控研究基因序列分析证实,在Ang II、ET-1、ANF和ADM基因的启动子区中均含有AP-1的结合位点,而且,这4种血管活性肽的表达也有赖于AP-1的活化。本部分实验探讨了AP-1的DNA结合活性与4种血管活性肽表达及其动态平衡之间的关系以及VSMC在该网络平衡中的地位,并揭示Ang II对4种血管活性肽相对水平调节的分子机制。

参考文献

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[3]Surface tension-assisted additive manufacturing.[J].Ragelle Hélo?se,Tibbitt Mark W,Wu Shang-Yun,Castillo Michael A,Cheng George Z,Gangadharan Sidharta P,Anderson Daniel G,Cima Michael J,Langer Robert.Nature communications.2018(1)

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[5]聂磊.血管活性肽在血管平滑肌细胞中的表达与调控机制[D].河北医科大学,2005.