小鼠Α1酸性糖蛋白(Α1-AGP)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

小鼠Α1酸性糖蛋白(Α1-AGP)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中Α1酸性糖蛋白(Α1-AGP)的含量。

实验原理：小鼠Α1酸性糖蛋白(Α1-AGP)ELISA试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（elisa）。往预先包被小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

小鼠Α1酸性糖蛋白(Α1-AGP)ELISA试剂盒

标本要求

1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

实验步骤：

1分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入标准品50μl；在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。小鼠α1酸性糖蛋白（α1-AGP）每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。轻轻晃动混匀，37℃温育60分钟。

2弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。

3.小鼠α1酸性糖蛋白（α1-AGP）每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

4.取出酶标板，每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

5.小鼠α1酸性糖蛋白（α1-AGP）测定：以空白孔调零，在450nm波长下测量各孔的吸光度值（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

6.根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，小鼠α1酸性糖蛋白（α1-AGP）再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的，其实际浓度应该乘以总稀释倍数。

应用^[4][5]

用于α1-酸性糖蛋白与妇科肿瘤患者应用紫杉醇类药物治疗毒副作用的相关性研究

研究就妇科肿瘤患者初始α1-酸性糖蛋白（Alpha-1-acid glycoprotein,AAG）浓度和紫杉醇血药浓度0.05μmol/L以上暴露时间（time point of blood concentration above 0.05μmol/L,Tc＞0.05）这两个指标与紫杉醇类药物治疗后的毒副作用相关性进行分析,试图为提高紫杉醇类药物治疗的药效,降低毒副反应提供参考依据,实现紫杉醇类药物的精准用药。

方法:（1）初始AAG水平与紫杉醇药物治疗引起的毒副作用的相关性:治疗前检测AAG水平,静脉滴注紫杉醇脂质体5天后检查白细胞（WBC）、中性粒细胞（ANC）、血红蛋白（HGB）和血小板（PLT）的结果并化疗后观察其乏力、呕吐、便秘等不良反应,探究AAG初始水平与紫杉醇脂质体药物毒副反应之间的关系。

（2）紫杉醇脂质体Tc＞0.05值和AAG在妇科肿瘤化疗中的应用:治疗前检测AAG水平,采用纳米增强免疫比浊法检测紫杉醇脂质体化疗后18~30 h的血药浓度。应用群体药物动力学模型软件换算出Tc＞0.05值。以Tc＞0.05值＜38h和Tc＞0.05值≥38h分为两组,分析紫杉醇脂质体Tc＞0.05值不同分组的初始AAG水平、白细胞抑制程度以及疗效差异。

结果:（1）按NCI-CTC v4.0毒副反应统计,71例患者中,仅4例发生3级以上乏力、便秘等非血液性毒副反应,初始AAG值与非血液性毒副反应等级分析,差异没有统计学意义（P＞0.05）;19例患者（26.76%）发生3~4级血液毒副反应,3~4级血液毒性组初始AAG水平低于0~2级血液毒性组初始AAG水平,差异具有统计学意义（P＜0.05）。

紫杉醇血药浓度Tc＞0.05值≥38h组比Tc＞0.05值＜38h组对于妇科肿瘤患者有更好的治疗效果同时有更大的几率发生白细胞抑制,差异具有统计学意义（P＜0.05）;Tc＞0.05值≥38h组的AAG水平要低于Tc＞0.05值＜38h组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。

结论:初始AAG水平与乏力、呕吐、便秘等不良反应无相关性,但初始AAG较低的患者更容易发生3~4级血液毒性。紫杉醇脂质体药代动力学参数Tc＞0.05值在≥38 h时有较好的疗效,但骨髓抑制程度也较高,初始AAG水平与紫杉醇脂质体Tc＞0.05值呈负相关,能有效预测紫杉醇血药浓度。

参考文献

[1]TC＞0.05 as a Pharmacokinetic Parameter of Paclitaxel for Therapeutic Efficacy and Toxicity in Cancer Patients[J].D.S.Xin,L.Zhou,C.Z.Li,S.Q.Zhang,H.Q.Huang,G.D.Qiu,L.F.Lin,Y.Q.She,J.T.Zheng,C.Chen,L.Fang,Z.S.Chen,S.Y.Zhang.Recent Patents on Anti-Cancer Drug Discovery.2018(3)

[2]Totalα1-acid glycoprotein determination in serum samples using disposable screen-printed electrodes and osmium（VI）as electrochemical tag[J].Tania Sierra,María Cristina González,Bego?a Moreno,Agustin G.Crevillen,Alberto Escarpa.Talanta.2018

[3]Plasma alpha-1-acid glycoprotein as a potential predictive biomarker for non-haematological adverse events of docetaxel in breast cancer patients[J].Rafid Salim Jabir,Gwo Fuang Ho,Muhammad Azrif Bin Ahmad Annuar,Johnson Stanslas.Biomarkers.2018(2)

[4]Seventy-Five Years of Research on Protein Binding[J].Axel Dalhoff.Antimicrobial Agents and Chemotherapy.2018(2)

[5]詹峰.α_1-酸性糖蛋白与妇科肿瘤患者应用紫杉醇类药物治疗毒副作用的相关性研究[D].江苏大学,2019.