支链氨基酸转氨酶2抗体的应用

背景^[1-3]

支链氨基酸转氨酶2抗体是可以特异性结合支链氨基酸转氨酶2的多克隆抗体，主要用于体外检测支链氨基酸转氨酶2的免疫学实验。

BCAT2是BCAA代谢过程中的个催化酶,催化BCAA分解为支链酮酸的可逆反应。脂肪分化过程中,BCAT2还参与支链氨基酸的代谢。

支链氨基酸转氨酶2免疫组化

CAA在人体游离氨基酸库里含量并不高(必需氨基酸的含量才占细胞中游离氨基酸总量的10%不到)，其中亮氨酸的生理活性最强，最具实用性(BCAA产品中亮氨酸的含量应该高一些)。

1、抗疲劳

BCAA同色氨酸进入大脑的载体相同，存在竞争关系，而色氨酸正是在脑内生成5-羟色胺(5-HT)，产生中枢疲劳感。所以有一个指标：BCAA/5-HT，值越低，机体抗中枢疲劳能力越弱。运动过程中BCAA的代谢加快。

所有游离氨基酸中代谢速度最快的，当然进入脑内的速度也加快了。如果BCAA水平较低，导致BCAA/5-HT值降低，容易疲劳。

2、抗肌肉分解

较长时间的运动(一般超过45分钟)中，当肌糖原大量消耗时，氨基酸参与供能的比例升高(可达10%~15%)。其中BCAA供能的速度和效率是所有氨基酸里最高的!所以保持肌肉细胞中较高的BCAA水平，对于拮抗肌肉结构蛋白分解有重要意义。

3、生氨作用

BCAA代谢率较高，同时产氨效率也是很高的，所以会增加机体的氨负担。在运动中，机体代谢水平提高，对氨的耐受力和排除率也相应有所提高，所以只要补充的不过量，运动前补充BCAA是利大于弊的。

应用^[4][5]

用于支链氨基酸转氨酶产生菌的筛选及其发酵条件的优化研究

通过对公厕附近的土壤样品进行筛选,由筛选平板分离到274株菌落较大的菌株,验证转化产物后得到14株进入复筛,选出一株支链氨基酸转氨酶活性相对较高的菌株WJ44。通过对菌落形态的观察、16S rRNA序列的比对和系统发育分析、生理生化实验,鉴定WJ44菌株为一株蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）,命名为Bacillus cereus WJ44。

通过单因素实验和响应面实验确定了Bacillus cereus WJ44发酵产支链氨基酸转氨酶的培养基组成为:葡萄糖20.99 g/L,蛋白胨16.85 g/L,牛肉膏5 g/L,玉米浆18.24 g/L,KH2PO4 3 g/L,MgSO4·7H2O 0.5 g/L;培养条件为:初始pH 7.0,培养温度37℃,装液量20 mL/250 mL三角瓶,摇床转速200 r/min,接种量3%。WJ44菌株在培养基组成和培养条件下培养10 h,其支链氨基酸转氨酶活力即可达45.79 U/mL,菌体干重8.64 g/L,分别比原来提高了40%与10%,是一株产酶和生长性能较佳的菌株。利用单因素实验和正交实验确定了全细胞酶催化的的转氨反应的条件为:底物L-亮氨酸15 g/L,丙酮酸12 g/L,酶液与底物溶液的配比1:1（V:V）,表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵3 g/L,辅酶5’-磷酸吡哆醛0.04 mmol/L,转氨反应温度40℃,底物溶液起始pH 9.0。

金属离子对转氨反应均有一定程度的抑制作用,Cu2+的抑制作用尤为明显。在条件下转氨反应8 h,产物α-酮异己酸浓度即可达5.63 g/L。通过对Bacillus cereus WJ44在连续培养中的生长动力学特性研究,发现以葡萄糖为限制性底物时,WJ44菌株的比生长速率和限制性底物的浓度符合Monod方程。其比生长速率μmax=0.438 h-1,饱和常数Ks=0.510 g·L-1。菌体生产率（DX）m=0.909 g·（L·h）-1,理论稀释速率Dm=0.388 h-1,基质得率系数Y x/s=0.159 g·g-1,维持系数m=0.0249 g·（g·h）-1。

参考文献

[1]Purification of branched-chain amino acid aminotransferase from Helicobacter pylori NCTC 11637[J].M.Saito,K.Nishimura,S.Wakabayashi,T.Kurihara,Y.Nagata.Amino Acids.2007(3)

[2]A branched-chain amino acid aminotransferase gene isolated from Hordeum vulgare is differentially regulated by drought stress[J].M.Malatrasi,M.Corradi,J.T.Svensson,T.J.Close,M.Gulli,N.Marmiroli.Theoretical and Applied Genetics.2006(6)

[3]Structure and function of branched chain aminotransferases[J].Susan Hutson.Progress in Nucleic Acid Research and Molecular Biology.2001

[4]Genes encoding for branched-chain amino acid aminotransferase are differentially expressed in plants[J].Michael A Campbell,Jignesh K Patel,Julie L Meyers,Lindsey C Myrick,Jeffrey L Gustin.Plant Physiology and Biochemistry.2001(10)

[5]王晶.支链氨基酸转氨酶产生菌的筛选及其发酵条件的优化[D].江南大学,2008.