人ALDO-KETO还原酶家族1成员B10(AKR1B10)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人ALDO-KETO还原酶家族1成员B10(AKR1B10)ELISA KIT用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中小鼠β-伴大豆球蛋白（β-CY）的含量。

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被ALDO-KETO还原酶家族1成员B10(AKR1B10)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的ALDO-KETO还原酶家族1成员B10(AKR1B10)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人ALDO-KETO还原酶家族1成员B10(AKR1B10)ELISA KIT

操作步骤：

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果计算

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

应用^[4][5]

用于口腔癌患者血清AKR1B10浓度与其临床病理特征相关性分析研究

通过检测血清AKR1B10蛋白在初诊的口腔癌（后经病理检查确诊）患者手术前及手术后血清中的浓度,同时对比健康人（经体检证实未发现肿瘤及明显血液学异常指标）血清中AKR1B10蛋白浓度,并收集口腔癌患者的临床病理信息,分析血清AKR1B10蛋白浓度与临床病理特征的相关性。

方法任意随机抽取未经抗肿瘤治疗且经病理检查确诊的150例口腔癌患者作为观察组,另随机入组50例健康体检者作为对照组。收集口腔癌患者临床病理信息,包括年龄、性别、组织类型、临床分期、病理分级、生活习惯等;采用磁微粒化学发光检测血清AKR1B10蛋白浓度,比较口腔癌术前和术后血清AKR1B10蛋白浓度差异及口腔癌术前与健康体检者血清中AKR1B10蛋白浓度差异。

采用SPSS 25.0统计学软件进行统计分析,采用Wilcoxon秩和检验、Mann-Whitney U非参数检验的分析方法进行各组间差异的比较,血清AKR1B10蛋白浓度检验效能采用受试者工作特征（ROC）曲线分析,寻找血清中AKR1B10蛋白浓度确定诊断口腔癌的截断值,分析AKR1B10蛋白与患者临床病理特征的关系。

结果1.口腔癌患者术前血清AKR1B10蛋白水平明显高于术后及健康对照组;进行亚组分析,口颊癌患者术前血清AKR1B10水平较健康对照组明显升高,舌癌组术前血清AKR1B10蛋白浓度也较健康人对照组高,但差异无统计学意义;齿龈癌、磨牙后区癌术前血清AKR1B10蛋白浓度与健康对照组相近,可能由于样本例数少,影响分析结果。

2. 口腔癌不同亚组术前术后血清AKR1B10蛋白浓度比较:舌癌、口颊癌、齿龈癌、磨牙后区癌术后血清AKR1B10蛋白的浓度均较术前明显下降。

3. 高分化口腔癌术前血清AKR1B10蛋白浓度较健康对照组升高;中分化,低分化口腔癌中血清AKR1B10蛋白浓度也较健康人上升,但差异均无统计学差异（P>0.05）。

4. 术前血清AKR1B10蛋白浓度与口腔癌患者年龄、性别、是否吸烟、是否饮酒、分化程度无明显相关性,嚼槟榔不良嗜好与口腔癌血清AKR1B10蛋白浓度呈正相关;术前血清AKR1B10蛋白的表达水平与肿瘤直径相关,肿瘤直径≤2cm口腔癌患者表达水平明显高于直径>2cm的口腔癌患者;

5. 探索性的应用血清AKR1B10蛋白水平辅助诊断及筛查口腔癌的临界值为276.675pg/ml,AUC值为0.626。其中AKR1B10在口颊癌辅助诊断中的临界值为297.785pg/ml,AUC值最高（0.707）。

结论1.口腔癌中血清AKR1B10蛋白浓度升高,对口腔癌的辅助诊断及筛查具有一定的意义,临界值为276.675pg/ml。尤其适用于口腔癌中口颊癌的早期辅助诊断及筛查,临界值为297.785pg/ml,AUC值最高（0.707）。2.嚼槟榔不良嗜好与口腔癌血清AKR1B10蛋白浓度呈正相关,吸烟、饮酒、年龄、性别与口腔癌血清AKR1B10蛋白浓度无明显相关性。

参考文献

[1]Overexpression of AKR1B10 predicts tumor recurrence and short survival in oral squamous cell carcinoma patients.[J].Fang Chih-Yeu,Lin Yun-Ho,Chen Chi-Long.Journal of oral pathology&medicine:official publication of the International Association of Oral Pathologists and the American Academy of Oral Pathology.2019(8)

[2]A Large-Scale Multicenter Study Validates Aldo-Keto Reductase Family 1 Member B10 as a Prevalent Serum Marker for Detection of Hepatocellular Carcinoma.[J].Ye Xu,Li Cunyan,Zu Xuyu,Lin Minglin,Liu Qiang,Liu Jianghua,Xu Guoguo,Chen Zhiyong,Xu Yongliang,Liu Long,Luo Diteng,Cao Zhe,Shi Guiyuan,Feng Zirui,Deng Hongyu,Liao Qianjin,Cai Chuan,Liao Duan-Fang,Wang Jing,Jin Junfei,Cao Deliang.Hepatology（Baltimore,Md.）.2019(6)

[3]Diagnostic and Prognostic Potential of AKR1B10 in Human Hepatocellular Carcinoma[J].Johanna K.DiStefano,Bethany Davis.Cancers.2019(4)

[4]Biomarkers and algorithms for diagnosis of ovarian cancer:CA125,HE4,RMI and ROMA,a review.[J].Dochez Vincent,Caillon Hélène,Vaucel Edouard,Dimet Jér?me,Winer Norbert,Ducarme Guillaume.Journal of ovarian research.2019(1)

[5]陈益芳.口腔癌患者血清AKR1B10浓度与其临床病理特征相关性分析研究[D].南华大学,2021.