人胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA KIT用于测定血清，血浆及相关液体等样本中胰岛素样生长因子1(IGF-1)的含量。

实验原理：试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平。用纯化的人胰岛素样生长因子1(IGF-1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素样生长因子1(IGF-1),再与HRP标记的胰岛素样生长因子1(IGF-1)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰岛素样生长因子1(IGF-1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人胰岛素样生长因子1(IGF-1)浓度。

人胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA KIT

操作步骤

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4][5]

用于胰岛素样生长因子-1（IGF-1）在不同类型脑肿瘤患者血清中表达水平的研究

探讨外周血中胰岛素样生长因子-1水平与各种类型脑肿瘤的关系,及垂体瘤患者、颅咽管瘤患者手术与患者血清中胰岛素样生长因子-1水平变化是否存在一定的联系。

方法：检测脑肿瘤患者193例,其中非侵袭性垂体瘤41例,胶质瘤36例,脑膜瘤33例,颅咽管瘤43例,侵袭型垂体瘤22例,肺癌脑转移18例,同时,配对留取脑瘤患者术后相应标本61例,其中非侵袭性垂体瘤34例,侵袭型垂体瘤15例,颅咽管瘤12例,全部病例均经MR及病理证实。

另作25例正常对照组,取自同期健康体检的人群,均排除相关疾病。实验组与对照组之间年龄、性别相匹配（F年龄=1.03,P>0.05,χ2性别=8.98,P>0.05）。各组标本均采集清晨空腹静脉血,术后实验组标本均于开颅术后0-3天采集。

实验采用酶联免疫吸附实验（ELISA）方法测定,测得各组患者血清中胰岛素样生长因子-1含量,采用SPSS16.0统计软件进行统计学分析,两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,配对样本比较采用配对t检验。结果：通过检测各组患者血清中IGF-1浓度。经过统计学分析研究发现：

1. 垂体瘤组与对照组间的差异具有统计学意义（P<0.05）,胶质瘤组、肺癌脑转移组与对照组间进行两两比较差异具有显著性统计学意义（P<0.01）,颅咽管瘤组、脑膜瘤组、对照组三组间进行两两比较差异无统计学意义（P>0.05）,垂体瘤组与胶质瘤组、肺癌脑转移组间比较差异无统计学意义（P>0.05）,垂体瘤组与颅咽管瘤组、脑膜瘤组间差异具有统计学意义（P<0.05）,胶质瘤组与肺癌脑转移组间比较差异无统计学意义（P>0.05）,胶质瘤组、肺癌脑转移组分别与颅咽管瘤组、脑膜瘤组进行两两比较差异均具有显著性统计学意义（P<0.01）。

2. 侵袭性垂体瘤组与非侵袭性垂体瘤组间差异具有统计学意义（P<0.05）,恶性脑肿瘤组与良性脑肿瘤组间的差异具有统计学意义（P<0.05）。

3. 侵袭性垂体瘤组手术前后血清中IGF-1浓度水平的差异不具备统计学意义（P>0.05）,非侵袭性垂体瘤组手术前后血清中IGF-1浓度水平的差异不具备统计学意义（P>0.05）,颅咽管瘤组手术前后血清中IGF-1浓度水平的差异具有统计学意义（P<0.05）。

结论：1.胰岛素样生长因子-1在不同类型脑肿瘤患者血清中表达的水平存在差异,可作为对脑肿瘤诊断的辅助依据。

2. 胰岛素样生长因子-1在良性脑肿瘤和恶性脑肿瘤患者血清中表达的水平存在差异,可帮助临床对肿瘤的恶性程度作出早期的判断。

参考文献

[1]Serum and biliary insulin-like growth factor I and vascular endothelial growth factor in determining the cause of obstructive cholestasis.[J].Alvaro Domenico,Macarri Gianpiero,Mancino Maria Grazia,Marzioni Marco,Bragazzi MariaConsiglia,Onori Paolo,Corradini Stefano Ginanni,Invernizzi Pietro,Franchitto Antonio,Attili Adolfo F,Gaudio Eugenio,Benedetti Antonio.Annals of internal medicine.2007(7)

[2]Loss of imprinting of insulin-like growth factor II is associated with increased risk of proximal colon cancer[J].Jyh-Ming Liou,Ming-Shiang Wu,Jaw-Town Lin,Hsiu-Po Wang,Shih-Pei Huang,Han-Mo Chiu,Yi-Chia Lee,Yen-Bo Lin,Chia-Tung Shun,Jin-Tung Liang.European Journal of Cancer.2007(8)

[3]Regulation of vascular endothelial growth factor expression by insulin-like growth factor-I in endometrial adenocarcinoma cells.[J].Bermont L,Lamielle F,Fauconnet S,Esumi H,Weisz A,Adessi G L.International journal of cancer.2000(1)

[4]Insulin-like Growth Factor I as aèCardiac Hormone:Physiological and Pathophysiological Implications in Heart Disease[J].Jun Ren,Willis K.Samson,James R.Sowers.Journal of Molecular and Cellular Cardiology.1999(11)

[5]李旭.胰岛素样生长因子-1（IGF-1）在不同类型脑肿瘤患者血清中表达水平的研究[D].天津医科大学,2012.