异戊烯焦磷酸1抗体的应用

背景^[1-3]

异戊烯焦磷酸1抗体是一类可以特异性结合异戊烯焦磷酸1的多克隆抗体，主要用于异戊烯焦磷酸1的体外免疫学检测实验。

焦磷酸酶是作用于双磷酸键上的酸酐水解酶。焦磷酸酶是一种催化一分子焦磷酸盐转化为两分子磷酸盐离子的酶。这是一个高放能的反应，因此此反应可偶联到一些热力学上不利的转化，以便驱动这些转化进行到完全。

异戊烯焦磷酸1免疫组化

异戊烯二磷酸是所有类萜化合物生物合成的前体。一般认为乙酰辅酶A是合成途径的起始材料，通过一系列酶促反应而形成。

生物体内的乙酰辅酶A合成酶可以将醋酸盐转变为乙酰辅酶A，同时糖酵解、脂肪酸代谢也能形成乙酰辅酶A。在乙酰基转移酶作用下，2个分子乙酰辅酶A缩合形成乙酰乙酰辅酶，在羟基甲基戊二酰辅酶A合成酶作用下，乙酰乙酰辅酶A与乙酰辅酶A进一步缩合形成β羟基一β甲基戊二酰辅酶A。

它在羟甲基戊二酰辅酶A还原酶作用通过还原反应产生3，5一二羟一3一甲基戊酸(MVA)，接着，在有ATP参与下，通过甲羟戊酸激酶作用，MVA转变为甲羟戊酸磷酸(MVAP)，再通过磷酸甲羟戊酸激酶作用，MVAP进一步磷酸化为甲羟戊酸焦磷酸(MVAPP)。在ATP存在下，经二磷酸甲羟戊酸脱羧酶作用，通过脱羧，MVAPP转变为生物学上重要的C；化合物异戊烯焦磷酸(IPP)。

应用^[4][5]

用于灵芝异戊二烯焦磷酸异构酶基因的克隆及其表达特性的研究

异戊二烯焦磷酸异构酶处于甲羟戊酸途径中的末端,催化无活性的异戊烯焦磷酸转化为有活性的亲核型异构体二甲基烯丙基焦磷酸,进而激活五碳化合物链的延伸反应,是萜类化合物合成过程中的一个重要的酶；而且它可能通过调节底物异戊烯焦磷酸和二甲基烯丙基焦磷酸的比例来调节相关代谢终产物的流向。

通过已报道过的其他物种的IDI1氨基酸序列,设计简并引物,PCR扩增得到该基因599 bp的特异片段；然后基于获得的特异片段序列,设计特异性5’-SEFA引物,以灵芝菌丝体DNA为模板扩增该基因的5’端和启动子区；通过3’-RACE的方法,以反转录cDNA为模板,扩增得到该基因的3端和3’UTR。对得到的序列进行拼接、比对分析后,设计引物,分别以灵芝的基因组DNA和cDNA为模板扩增得到异戊二烯焦磷酸异构酶基因（idil）的基因组序列和cDNA全长序列。基因组全长为985 bp,cDNA全长为759 bp,其编码一个252个氨基酸组成的蛋白质。

对灵芝异戊二烯焦磷酸异构酶基因的基因组序列和cDNA序列的对比分析表明,该基因由3个外显子和2个内含子构成,它们的长度分别为59 bp（intronl）、167 bp（intron2）。将该基因转入具有合成β-胡萝卜素生物合成途径的大肠杆菌TOP10 F’,发现该基因的导入使原菌株中的β-胡萝卜素生物积累显著增加,通过这种方法进一步证明了我们得到的基因是有功能的。

通过软件分析,预测灵芝IDI1蛋白质分子量为28.70777kD,等电点为5.36。利用Plant care网站对得到灵芝idil基因及1202bp启动子序列预测分析,结果显示：灵芝idil基因的启动子区域含有17个CAAT box、1个推定的TATA box等典型的真核生物启动子元件。

另外,还含2个Spl元件、1个ATC-motif、1个Box 4（光调控顺时作用元件）、1个LTR元件（低温响应元件）、1个Box-W1（真菌激发子响应元件）、2个auxin-responsiveelement（茁长素响应元件）、1个MYBHvl结合位点、4个CGTCA-motif、2个TGACG-motif（茉莉酸甲酯响应元件）、2个MBS（与干旱诱导有关的MYB结合位点）等。

参考文献

[1]Current progress in the study on biosynthesis and regulation of ganoderic acids[J].Liang Shi,Ang Ren,Dashuai Mu,Mingwen Zhao.Applied Microbiology and Biotechnology.2010(6)

[2]Methyl jasmonate induces ganoderic acid biosynthesis in the basidiomycetous fungus Ganoderma lucidum[J].Ang Ren,Lei Qin,Liang Shi,Xin Dong,Da Shuai Mu,Yu Xiang Li,Ming Wen Zhao.Bioresource Technology.2010(17)

[3]Enhanced biosynthetic gene expressions and production of ganoderic acids in static liquid culture of Ganoderma lucidum under phenobarbital induction[J].Cui-Xia Liang,Ying-Bo Li,Jun-Wei Xu,Jia-Le Wang,Xiao-Ling Miao,Ya-Jie Tang,Tingyue Gu,Jian-Jiang Zhong.Applied Microbiology and Biotechnology.2010(5)

[4]Cloning and Characterization of a Gene Encoding HMG-CoA Reductase from Ganoderma lucidum and Its Functional Identification in Yeast[J].Chang-Hua SHANG,Fen ZHU,Na LI,Xiang OU-YANG,Liang SHI,Ming-Wen ZHAO,Yu-Xiang LI.Bioscience,Biotechnology,and Biochemistry.2008(5)

[5]姚健.灵芝异戊二烯焦磷酸异构酶基因的克隆及其表达特性的研究[D].南京农业大学,2011.