酰基辅酶A脱氢酶短链抗体的应用

背景^[1-3]

酰基辅酶A脱氢酶短链抗体是一类可以特异性结合酰基辅酶A脱氢酶短链的多克隆抗体，主要用于体外检测酰基辅酶A脱氢酶短链的免疫学实验。

抗体经x线晶体衍射结构分析发现，Ig由四条多肽链组成，各肽链之间南数量不等的链间二硫键连接。

Ig可形成“Y”字型结构，称为Ig单体，是构成抗体的基本单位。在一定条件下，Ig分子肽链的某些部分易被蛋白酶水解为不同片段。

木瓜蛋白酶(papain)和胃蛋白酶(pepsin)是常用的两种Ig蛋白水解酶，并可籍此研究Ig的结构和功能，分离和纯化特定的12多肽片段。

短链酰基辅酶A脱氢酶(Short-chain acyl-CoA dehydrogenase.SCAD)是脂肪酸氧化的关键酶,在心脏的发育发展中起着重要的作用.SCAD能够特异性地分解底物短链酰基辅酶A,是脂肪酸β氧化中的个限速酶。

酰基辅酶A脱氢酶

短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症（Short-chain acyl-coenzyme A dehydrogenase deficiency,SCADD）是一种常染色体隐性遗传病，由于短链酰基辅酶A脱氢酶的缺乏造成短链脂肪的代谢障碍。

脂肪酸β-氧化的过程是在粒线体中进行。脂肪酸是一种很长的碳链，氧化时以两个碳为一个单位逐渐减短。每一次缩短都要经过四个步骤：由酰基辅酶A变成烯酰辅酶A、羟脂酰辅酶A、酮脂酰辅酶A最后再回到酰基辅酶A。但是代谢不同长度的脂肪酸有时需要不同的酶，使得参与的酶种类增加，所引起之疾病也更为复杂。

应用^[4][5]

用于短链酰基辅酶A脱氢酶在心肌细胞凋亡中的作用研究

研究SCAD在心肌细胞凋亡中的变化,探讨腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK）/过氧化物酶体增殖剂活化受体α（peroxisome proliferatoractivated receptorα,PPARα）/SCAD信号途径对心肌细胞凋亡的调控作用,为确立SCAD作为心肌细胞凋亡的新靶点提供理论依据。

方法1.采用叔丁基过氧化氢（tert-butyl hydroperoxide,t BHP）刺激原代心肌细胞,建立心肌细胞凋亡模型。检测心肌细胞存活率和SCAD的m RNA、蛋白表达变化。

2. 采用SCAD干扰序列siRNA-1186,检测siRNA-1186刺激心肌细胞后,SCAD的表达量、酶活性的改变以及脂质代谢的变化,同时检测心肌细胞凋亡指标,细胞存活率,细胞凋亡率,细胞凋亡蛋白caspase3、Bcl-2、Bax的变化,并与t BHP诱导的心肌细胞凋亡模型相比较。

3. 采用PPARα激动剂非诺贝特（Fenofibrate,Feno）（10μM）预处理30 min后,再以t BHP或siRNA-1186刺激心肌细胞。检测PPARα和SCAD的m RNA、蛋白表达变化,SCAD酶活性变化,心肌细胞游离脂肪酸和ATP含量变化,同时检测心肌细胞凋亡指标,细胞存活率,细胞凋亡率,细胞凋亡蛋白caspase3、Bcl-2、Bax的变化。

4.采用AMPK激动剂AICAR（0.5m M）预处理30 min后,再以t BHP刺激心肌细胞。检测磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶α（p-AMPKα）、PPARα和SCAD的表达量变化,SCAD酶活性变化,心肌细胞游离脂肪酸和ATP含量变化,同时检测心肌细胞凋亡指标,细胞存活率,细胞凋亡率,细胞凋亡蛋白caspase3、Bcl-2、Bax的变化。

参考文献

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[5]曾振华.短链酰基辅酶A脱氢酶在心肌细胞凋亡中的作用[D].广东药科大学,2016.