盐霉素检定培养基Ⅰ的应用

背景^[1-3]

盐霉素检定培养基Ⅰ可用于绿脓杆菌等革兰氏阴性菌的选择培养。盐霉素是由白色链霉菌DSM 41398产生的一种离子载体抗生素,它能够妨碍细胞内外Na+/Ca2+的传递,破坏膜内外离子平衡,造成细胞死亡,对革兰氏阳性菌(包括分枝杆菌和一些丝状真菌)及各种球虫有很强的抑制和杀灭作用。

盐霉素检定培养基Ⅰ操作步骤：

（一）准确称量试剂：根据不同的菌类和用途，选择适宜的培养基，培养基所需试剂必须纯净。

（二）校正pH值：将称量好的培养基各种成分放入容器内，标记划线，加热溶解，补充水分，测定酸碱度，常用pH6.8～8.0的精密试纸或酸度计测定。用1N NaOH和1N HCl调节pH值到适宜范围内。

（三）过滤：将玻璃漏斗置铁架上，再用纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中，将上述培养基倒入其中过滤至透明。

（四）分装：将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内（试管内每支装5mL；三角瓶中装100～150ml），塞好棉塞用牛皮纸包扎好，准备灭菌。

（五）灭菌：培养基的灭菌，常用高压蒸汽灭菌法。一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死，但细菌的芽胞有较强的抗热性，须经高压蒸汽灭菌才能达到彻底灭菌的目的。

根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理，即压力越大，蒸汽温度就越高。因此，在同一温度条件下，采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好。而且在湿热情况下，菌体吸收水分后，其蛋白质易于凝固变性，因为蒸汽的穿透力强，杀菌效果好。

应用^[4][5]

用于高脂酶活力盐霉素高产菌株选育及发酵工艺优化研究

盐霉素是由白色链霉菌（Streptomyces albus）产生的聚醚类动物专用抗生素,作为抗球虫剂在世界范围内得到普及,特别是其高效广谱性、低耐药性和低残留,对肉鸡、猪、牛等增重效果显著等特点得到养禽业的认可。

国内于90年代初开始生产盐霉素。由于发酵单位低,造成成本高,质量差,产品缺乏竞争力。而通过菌种改良和发酵工艺优化,提高发酵单位、降低成本的有效手段。

建立了分光光度法测定发酵培养基中脂肪酸、豆油和发酵液中脂肪酶活力的方法。脂肪酸与Cu2+在一定条件下形成淡绿色化合物,在715nm处有吸收。通过测定发酵液中脂肪酸和发酵液中豆油水解生成的脂肪酸及其变化,可计算出豆油含量和酯酶活力。

建立了高效的高产菌株筛选方法。盐霉素的合成途径为聚多酮途径,起始单位是三碳单位丙二酰CoA。以植物油或动物油作为培养基碳源能提供更多的三碳和二碳单位,有利于盐霉素的合成。通过比较具有不同生产能力的盐霉素产生菌的脂肪酶活力,发现酯酶活力与盐霉素发酵单位呈正相关的关系,高产菌株具有较高的脂肪酶活力。

以脂肪酶活力为初筛指标筛选盐霉素高产菌株,可大大提高获得盐霉素高产菌株的几率。出发菌株纯化后,经紫外线和氯化锂复合诱变处理,在含豆油的固体培养基上以豆油水解圈直径与菌落直径的比为指标进行初筛,选出水解圈直径与菌落直径的比大的菌珠。

再通过摇瓶复筛,从中筛选出盐霉素高产菌株。所筛选出的菌株发酵水平比出发菌株提高了13.5%。该筛选方法比传统的方法,减少初筛工作量,提高了筛选效率。对筛选出的盐霉素高产突变株,进行生理特性考查。结果发现,该菌株遗传稳定,生长快,酯酶活力高,对氧的需求低。

参考文献

[1]Enhancing of erythromycin production by Saccharopolyspora erythraea with common and uncommon oils[J].J.Hamedi,F.Malekzadeh,A.E.Saghafi-nia.Journal of Industrial Microbiology&Biotechnology.2004(10)

[2]Influence of short-chain fatty acids on the production of spiramycin by Streptomyces ambofaciens[J].Applied Microbiology and Biotechnology.1992(6)

[3]A simple and rapid colorimetric method for determination of free fatty acids for lipase assay[J].Dae Y.Kwon,Joon S.Rhee.Journal of the American Oil Chemists’Society.1986(1)

[4]发酵工艺原理[M].中国医药科技出版社,熊宗贵主编,1995

[5]石永芝.高脂酶活力盐霉素高产菌株选育及发酵工艺优化[D].山东大学,2005.