ANTI-CASPASE-3抗体的应用

背景^[1-3]

ANTI-CASPASE-3抗体是以ANTI-CASPASE-3为抗原以兔为宿主制得的免疫抗体，可以特异性结合CASPASE-3。主要用于检测CASPASE-3的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

pro-caspase-3含有277个氨基酸残基，分子量约32kD，与ICE有30%同源性，与CED-3有35%同源性，是caspase家族中与CED-3同源性最高的，无论从结构同源性还是从底物特异性来看都与CED-3很相似，所以有人认为它是CED-3在哺乳动物中的同源蛋白。caspase-3的原结构域明显短于ICE，但蛋白酶活性中心和与结合底物有关的保守的氨基酸均与ICE一致。

pro-caspase-3在活化过程中从Asp28~Ser29和Asp175~Ser176两处被剪切，形成P17(29~175)和P10(182~277)两个片段，相当于ICE的P20和P10，两种亚基再组成活性形式的caspase-3。pro-caspase-3本身并没有催化活性，在活化时首先由颗粒酶B(GrzB)或caspase-10在D175剪切下小片段后它才被部分活化，随后则可进行下一步的自我催化。在剪切原结构域时可能还有其它caspase如ICE的参与。

Caspase-3是一种蛋白酶，1994年Fernandez-Alnemri等在BenBank表达序列标记(expression sequence tag,EST)数据库中找到一段与ICE/CED-3活性中心同源的序列，用它合成探针后，筛选人Jurkat T淋巴细胞cDNA文库，从中克隆到一种新基因，因其编码分子量为32kD的半胱氨酸蛋白酶而称之为CPP32(cysteine protease protein,32kD)。一般认为caspase-3是细胞凋亡过程中最主要的终末剪切酶，也是CTL细胞杀伤机制的重要组成部分。

应用^[4][5]

用于P38MAPK抑制剂对血管性痴呆大鼠海马细胞凋亡、Bcl-2、Caspase-3表达及其学习记忆能力的影响研究

通过观察血管性痴呆大鼠海马区p38MAPK磷酸化的变化,探讨p38MAPK在血管性痴呆发病机制中的作用,并利用p38MAPK抑制剂SB202190作为研究干预方式,血管性痴呆大鼠侧脑室注射SB202190抑制p38MAPK信号通路后,通过Western Blot蛋白印迹法、免疫荧光法和激光扫描共聚焦显微镜等技术观察血管性痴呆大鼠海马区神经元凋亡、Bcl-2和Caspase-3凋亡因子表达变化和大鼠学习记忆能力的改变,探讨p38MAPK信号通路对血管性痴呆大鼠学习记忆的影响,并初步探讨其作用机制。

应用两血管法(bilateral common carotid artery occlusion,2VO)建立血管性痴呆(VD)模型,将60只三月龄雄性Wistar大鼠随机分成假手术组、血管型痴呆模型组和P38MAPK抑制剂SB202190组。各组大鼠均采用侧脑室注射给药方式给药,SB202190组大鼠应用微量注射器将10μmol/LSB202190溶液5μL进行侧脑室注射,模型组和假手术组大鼠给予侧脑室注射等量的1%DMSO溶媒液,注射药物后应用TUNEL法检测海马区神经元凋亡,应用蛋白印迹(Western blot)法检测大鼠海马区P38MAPK磷酸化变化,免疫荧光法和激光共聚焦显微镜观察大鼠海马区Bcl-2和Caspase-3表达。

结果荧光强度检测结果显示,TUNEL阳性细胞以绿色荧光表示。假手术组切片偶见TUNEL阳性(绿色荧光)细胞,模型组、SB202190组阳性细胞明显增多,差异有显著性意义；SB202190组与模型组相比,TUNEL染色阳性细胞明显减少。

以免疫印迹法观察各组大鼠海马p38MAPK磷酸化变化,三组大鼠海马组织内磷酸化p38MAPK的表达比较有显著性差异,模型组的表达在明显升高,而p-p38MAPK在假手术组仅有少量的表达,SB202190组的p-p38MAPK表达较模型组明显降低,有显著性差异。Bcl-2蛋白在本实验中标记为绿色荧光。

参考文献

[1]Transient focal cerebral ischemia induces long-term cognitive function deficit in an experimental ischemic stroke model[J].Wenjun Li,Renqi Huang,Ritu A.Shetty,Nopporn Thangthaeng,Ran Liu,Zhenglan Chen,Nathalie Sumien,Margaret Rutledge,Glenn H.Dillon,Fang Yuan,Michael J.Forster,James W.Simpkins,Shao-Hua Yang.Neurobiology of Disease.2013

[2]Mechanism of Activation in NMDA Receptors[J].Vasanthi Jayaraman,Anu Rambhadran.Biophysical Journal.2011(3)

[3]p38 MAPK and ERK1/2 dictate cell death/survival response to different pro-oxidant stimuli via p53 and Nrf2 in neuroblastoma cells SH-SY5Y[J].Giuseppe Filomeni,Sara Piccirillo,Giuseppe Rotilio,Maria R.Ciriolo.Biochemical Pharmacology.2012(10)

[4]Focal Adhesion Kinase Activates NF-κB via the ERK1/2 and p38MAPK Pathways in Amyloid-β25-35-Induced Apoptosis in PC12 Cells[J].Xichao Wang,Qun Chen,Da Xing.Journal of Alzheimer’s Disease.2012(1)

[5]杨申.P38MAPK抑制剂对血管性痴呆大鼠海马细胞凋亡、Bcl-2、Caspase-3表达及其学习记忆能力的影响[D].山东大学,2013.