Anti-SIRT1抗体的应用

背景^[1-3]

Anti-SIRT1抗体是一类可以特异性结合Anti-SIRT1的多克隆抗体，主要用于检测Anti-SIRT1的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中Anti-SIRT1水平。用纯化的Anti-SIRT1抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Anti-SIRT1，再与HRP标记的Anti-SIRT1抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Anti-SIRT1呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中Anti-SIRT1浓度。

SIRT1是一种NAD+（烟酰胺腺苷二核苷酸）依赖的脱乙酰化酶，与酵母菌沉默信息调节因子Sir2具高度同源性。它主要通过对多种非组蛋白和组蛋白的去乙酰化作用，参与多种细胞生物学功能。

Sirtuins家族是一个NAD+依赖的家族，于哺乳动物细胞中广泛表达。目前该家族共有7个成员，分别为：SIRT1、SIRT2、SIRT3、SIRT4、SIRT5、SIRT6、SIRT7。SIRT2存在于细胞质，SIRT3、SIRT4和SIRT5位于线粒体，SIRT6、SIRT7位于细胞核。

由于它们在细胞中分布位置和结构上的差异，使其产生了不同的酶活性。Sirtuins家族与衰老相关疾病有关，例如：神经退行性疾病、心血管疾病等。在Sirtuins家族中，SIRT1是与酵母菌沉默信息调节因子Sir2同源性最高的成員，该基因位于10号染色体，共编码了747个氨基酸，其蛋白质相对分子量约为120 kDa，主要分布区域为细胞核。

NAD+/NADH结合区是SIRT1的活性中心，这样的关键结构决定了SIRT1在哺乳动物细胞中的重要作用。它可以脱去组蛋白H1、H3和H4的乙酰基，与此同时，也可以作用于许多非组蛋白，例如：p53、PGC-1等，还可以修饰PARP1和Ku 70等DNA修复蛋白质。已有的研究表明，SIRT1可以通过调节Wnt/-catenin通路来调节骨代谢。

应用^[4][5]

用于SIRT1信号通路通过氧化应激参与大鼠慢性脑缺血致认知损伤的研究

SIRT1（沉默信息调节因子1）是NAD+依赖性蛋白脱乙酰酶，在细胞分化、衰老、凋亡、生理节律、代谢调控、转录调节、信号转导、氧化应激等多种重要的生物学过程中发挥重要作用。

最近的氧糖剥夺体外实验、急性脑缺血和缺血预处理动物实验表明SIRT1通过抗氧化、抗炎、减少凋亡等机制发挥神经保护作用，并有证据表明SIRT1是控制出生后血管生长的内皮细胞基因表达的关键调节因子，提示它可能在慢性脑缺血状态仍发挥重要作用。

通过双侧颈总动脉永久性结扎法（双血管阻断，即2-VO）建立了慢性脑缺血的大鼠痴呆模型，利用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力，通过免疫组化和Wstern blot法检测慢性缺血时SIRT1在不同时间点的表达变化，并利用激活剂白藜芦醇及抑制剂EX-527对模型进行干预，利用免疫组化、实时定量PCR及Wstern blot检测SIRT1信号通路下游底物磷酸化FOXO3α（Ser253）、PGC-1α表达水平变化，及SIRT1信号通路对氧化应激的影响，最终为SIRT1信号通路的抗血管性认知损伤作用提供更多的理论依据。

参考文献

[1]Sirt1 Mediates Hyperbaric Oxygen Preconditioning-Induced Ischemic Tolerance in Rat Brain[J].Wenjun Yan,Zongping Fang,Qianzi Yang,Hailong Dong,Yan Lu,Chong Lei,Lize Xiong.Journal of Cerebral Blood Flow&Metabolism.2013(3)

[2]Adult mice maintained on a high-fat diet exhibit object location memory deficits and reduced hippocampal SIRT1 gene expression[J].Frankie D.Heyward,R.Grace Walton,Matthew S.Carle,Mark A.Coleman,W.Timothy Garvey,J.David Sweatt.Neurobiology of Learning and Memory.2012(1)

[3]SIRT1-mediated deacetylation of MeCP2 contributes to BDNF expression[J].Loredana Zocchi,Paolo Sassone-Corsi.Epigenetics.2012(7)

[4]Redox implications of AMPK-mediated signal transduction beyond energetic clues[J].Simone Cardaci,Giuseppe Filomeni,Maria Rosa Ciriolo.Journal of Cell Science.2012(9)

[5]陈罕.SIRT1信号通路通过氧化应激参与大鼠慢性脑缺血致认知损伤的研究[D].吉林大学,2013.