黏蛋白染色液(温和甲基化法)的染色原理及注意事项

背景及概述^[1-2]

黏蛋白是由上皮细胞产生、分泌的由黏多糖和蛋白质结合的复合蛋白，其分子量在400kD以上，是黏液的主要成分，保护细胞免受细胞外物质的侵害，并且起润滑剂的作用。这是一类复合蛋白质，以黏多糖(氨基多糖)为辅基与蛋白部分共价结合，分子中结合多条长键氨基多糖，糖含量常超过其蛋白部分，故现称蛋白多糖。黏蛋白存在于骨、软骨及其他结缔组织中。黏液物质染色有多种方法，如AB-PAS染色、黏液HID-AB染色、标准阿利新蓝染色等。以上方法大多是利用阿利新蓝(Alcian)属于阳离子染料可与酸性基团结合，也即阿尔辛蓝与组织内含有的阴离子基团如羧基和硫酸根形成不溶性复合物这一原理。

黏蛋白染色液(温和甲基化法)属于化学修饰和阻断法的一种，其原理是利用含酒精的碱性溶液裂解耐酶唾液酸中的O-乙酰基，O-乙酰基的去除及唾液酸侧链羟基的形成恢复了唾液酸对PAS的反应性。Alcian染色液pH值为2.5时，组织内的羧基电离，带有一个负电荷，与阿利新蓝中的阳离子形成盐键，使带有羧基的组织(如蛋白多糖/透明质酸以及上皮酸性黏蛋白)染色，主要用于鉴别黏蛋白中的酸性基团。

注意事项^[1]

黏蛋白染色液(温和甲基化法)处理时间超过4h有可能导致硫酸根水解。需要阳性对照片以便验证甲基化程序的有效性。

主要参考资料

[1] 黏蛋白染色液(温和甲基化法)操作说明   

[2] 临床肝病实验诊断学