醋酸戈舍瑞林的药效及作用

发布日期:2020/1/10 14:55:45

背景及概述[1]

促性腺激素释放激素，也称作促黄体激素释放激素(LHRH)，在下丘脑中合成。它是一种多肽荷尔蒙，其主要功能是使垂体释放卵泡雌激素(FSH)和黄体化激素(LH)，可用于治疗某些癌症。目前应用较多的用于治疗癌症的LHRH类似物主要有戈舍瑞林、曲普瑞林、亮丙瑞林等。其中戈舍瑞林是促性腺激素释放激素人工合成十肽，被用于控制子宫内膜异位症及子宫腺肌病的临床症状和体征，预防子宫内膜异位症术后复发，均有良好的效果。长期使用戈舍瑞林可抑制脑垂体生成素的合成，从而引起男性血清睾丸酮和女性血清雌二醇的下降，停药后这一作用可逆，初期用药时可暂时增加男性血清睾丸酮和女性血清雌二醇的浓度。

目前市售的戈舍瑞林缓释制剂商品名(中文名诺雷得)是一种由阿斯利康开发销售的植入剂，1996年FDA批准上市，适应症为闭经前的晚期乳腺癌、子宫内膜异位症和前列腺癌。该制剂是一种直径为1mm，长度为3-6mm的棒状颗粒，临床使用时每月注射一次剂量：3.6mg/支，成人3.6mg每28日1次，作腹前壁皮下注射，其药栓预置于一次性针筒内，注射针头相当于16号穿刺针头，长度约30mm，因此与一般药物皮下注射相比，注射时引起的疼痛程度要大，注射后导致皮下出血情况较多。鉴于醋酸戈舍瑞林的理化稳定性及临床适应症的用药特点，患者常常需要长期给药，因此为了提高患者的顺应性，被开发成长效缓释制剂是一个众望所认同的研究方向。而采用微球制剂比植入剂在为患者注射时，会大幅降低患者的疼痛及出血情况。目前上市的几种LHRH类似物微球多为长效缓释制剂，其临床使用的成功进一步激发了醋酸戈舍瑞林微球的研发工作。目前就醋酸戈舍瑞林的合成方法就归结于两类，一种为固相合成方法一种为液相合成方法，但每种方法都有各自的优缺点。

规格[2]

注射埋植剂：3.6mg。

药理作用[3]

本药是一种合成的、促黄体生成素释放激素的类似物，长期使用可抑制垂体的促黄体生成激素的分泌，从而引起男性血清睾酮和女性血清雌二醇的下降，停药后这一作用是可逆的。男性病人在次用药之后21日左右，睾酮浓度可降低到去势后的水平，在每28天用药1次的治疗过程中，睾酮浓度一直保持在去势后的浓度范围内。这种睾酮抑制作用可使大多数病人的前列腺肿瘤消退，症状改善。女性患者在初次用药后21日左右，血清雌二醇浓度受到抑制，并在以后每28天的治疗中维持在绝经后水平。这种抑制与激素依赖性的乳腺癌，子宫内膜异位症相关。

药代动力学[3]

本药具有几乎完全的生物利用度。每4周使用一注射埋植剂，可保持有效血药浓度，而无组织蓄积。诺雷德的蛋白结合能力较差，在肾功能正常的情况下，血浆清除半衰期为2-4小时，肾功能不全病人的半衰期将会延长，但对于每月都使用埋植剂的患者来说，这影响非常小，故没有必要改变这些病人的用量。在肝功能不全的病人中，药代动力学无明显的变化。

毒理研究[3]

在长期重复使用诺雷德的雄性鼠中，曾观察到良性脑垂体肿瘤的发病率上升，这一事实与以前已观察到的行外科去势后的大鼠的情形相似，但尚未发现与人体使用的经验有任何关联。在小鼠实验中，长期重复使用数倍于人类常用剂量的诺雷德后，可发现胰岛细胞及幽门部胃粘膜细胞增生。这些事实与临床的关系尚不清楚。

适应证[2]

绝经后乳腺癌，特别是他莫昔芬耐药的患者。

用法用量[2]

①晚期前列腺癌的姑息治疗。②治疗绝经前及围绝经期晚期乳腺癌、子宫内膜异位和子宫肌瘤。

不良反应[2]

①内分泌及代谢系统：常见面部发热、潮红。还可见乳房肿胀。此外，女性可见性欲降低、阴道干燥、月经失调，男性可见阳痿。②心血管系统：国外有转移性前列腺癌患者用药后发生静脉血栓的报道。③中枢神经系统：可见头痛，国外有用药后出现硬膜外脊髓压迫的报道。④消化系统：可见恶心，少见味觉障碍、腹泻、腹痛、齿龈萎缩。⑤泌尿生殖系统：少数患者用药早期可见血尿和尿道阻塞加重。国外偶有子宫肌瘤淋巴细胞浸润的报道。⑥皮肤：可见皮疹、皮肤瘙痒、注射部位疼痛，个别可发生多软骨炎。⑦骨骼：本药治疗前列腺癌开始阶段病情可加重，表现为骨痛加剧，有时可见下肢软弱无力和感觉异常。

注意事项[2]

(1)慎用：①输尿管梗阻引起肾损伤患者。②脊髓压迫患者。③有引起骨矿物质密度降低的治疗史及危险因素的患者。(2)常用的注射部位为上腹壁，但也可在下腹中线，可在注射前局部用麻醉剂。(3)男性晚期前列腺癌治疗开始时可并用氟他胺(Flutamide)。(4)戈舍瑞林10.8mg的植入制剂不适用于妇女。(5)每天给0.2～0.6mg的可乐定(Clonidine)可治疗面部发热的不良反应。

制备[3]

醋酸戈舍瑞林的固相合成方法，包括以下步骤：

步骤一、根据预设替代度sub（0.6mmol/g）=n（合成规模）/（X(裸2-CTCResin+n*M）氨基酸分子量这里指Fmoc-Pro-OH的分子量）可计算出X(裸2-CTCResinz的质量)=266gFmoc-Pro-OH在合成树脂的步骤中投料量为摩尔量的1.3倍即计算得出Fmoc-Pro-OH为87g将称取替代度为1.1~1.3mmol/g的2-CTCResin266g（合成规模200mmol）加入反应柱中同时加入3000mlDMF溶胀20min，溶胀后抽掉DMF，在加入3000mlDMF洗涤两次，每次1min.将称量好的Fmoc-Pro-OH87g在DMF/DCM的混合溶液中冰浴条件下加入摩尔量两倍的DIPEA(N，N-二异丙基乙胺)的作用下，室温反应，反应时间由所期待的替代度决定。反应后处理DMF洗涤5次每次3000ml每次1min，然后加入3000ml封闭液（DCM：甲醇：DIPEA=80：15：5）封闭两次每次10min得到sub=0.6mmol/g的Fmoc-Pro-CTCResin，加入3000ml20%DBLK（哌啶：DMF=1：4）去除Fmoc两次，每次时间为10min待去除完毕后加入3000m的DMF洗涤两次，得到H-Pro-CTCResin；这里所述Fmoc-Pro-OH和2-CTCResin的结构式同权力要求说明书步骤一。

步骤二、按照常规的固相合成方法，将步骤一中的脱完Fmoc的H-Pro-CTCResin用DMF洗涤4次，每次3000ml，洗涤时间1min，将称量好Fmoc-Arg(NO2)-OH9(摩尔量的3倍)、和HOBT(摩尔量的3倍)投入反应柱中补加DIC、反应1h、待反应完毕后取树脂20-30粒用少量DMF洗涤两遍进行茚三酮检测显阳性则表明反应未完全需继续反应或是重复偶联，若检测显阴性则表明反应完全可进行下一步的偶联反应，按以上步骤依次偶联以下Fmoc保护的氨基酸Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Ser(tBu)-OH和Fmoc-Tyr(Bzl)-OH得到Fmoc-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-CTCResin；

步骤三、将Fmoc-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-CTCResin加入3000mlDBLK去除Fmoc后DMF洗涤4次，每次3000ml，时间1min，加入称量好HBTU（摩尔量的3倍）和Fmoc-Ser-OH(摩尔量的3倍)投入反应柱中补加DIPEA和DCM使其搅拌均匀反应10min抽掉反应液加入DMF洗涤3次，每次3000ml，洗涤时间1min取树脂20-30粒茚三酮检测显阳性则表明反应未完全需继续反应或是重复偶联，若检测显阴性则表明反应完全可进行下一步的偶联反应按以上步骤偶联Fmoc-Trp-OH得到Fmoc-Trp-Ser-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-CTCResin；

步骤四、按照常规的固相合成方法同步骤二，采用HOBT/DIC、反应1h、DMF作溶剂依次偶联Fmoc-His(Trt)-OH、Pyr得到H-Pyr-His(Trt)-Trp-Ser-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-CTCResin肽树脂520g；

步骤五、按1：10（w：v）的树脂与裂解液的比例配制全保护裂解液5200mL（V三氟乙醇：V二氯甲烷=1：4）加入到H-Pyr-His(Trt)-Trp-Ser-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-2-CTCResin肽树脂中的搅拌反应2h，待反应完毕后过滤抽掉树脂保留溶液目的去除其载体2-CTCResin；

步骤六、将全保护裂解液取出1ml作HPLC分析定位出峰时间1，然后再将其溶液用DIPEA（N，N-二异丙基乙胺）调成偏碱性PH=7.8-8.5优选7.8-8.2按摩尔量的3倍将称量好的盐酸氨基脲和PyBop（1H-苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基六氟磷酸盐[用于肽的偶联剂）加入PH在7.8-8.2左右的全保护裂解液中进行反应偶联，反应时间1h，待反应完毕后取出1ml同样条件下作HPLC分析定位出峰时间2，然后根据峰型的变化及有无前移情况从而判断跟踪氨基脲的偶联情况，如峰型有变化但反应前的峰1没有完全转变到反应1h后的峰2说明还未反应完全需继续反应，若反应前的峰1完全转变为反应1h后的峰2说明已经反应完全则可以进行下一步实验最后得到保留侧链保护基的戈舍瑞林肽溶液即Pyr-His(Trt)-Trp-Ser-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg（NO2）-Pro-Azgly-NH2再将其溶液旋蒸浓缩1h后变为淡黄色粘稠状物；

步骤七、配置20%TFA/DCM的裂解液（v：v=1：4）缓慢加入到步骤六中的粘稠状物中使其搅拌室温裂解2h，再将其裂解液缓慢加入冰冻的乙醚中放置30min进行沉降即得到去除His(Trt)上的侧链保护基Trt前体肽IIPyr-His-Trp-Ser-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg（NO2）-Pro-Azgly-NH2320g

步骤八、将步骤七的白色固体粗肽真空抽干按1g/4ml用甲醇溶解溶解体积为1110ml，加入甲酸铵32g和Pa/c16g进行氢化反应去除肽序中侧链保护基NO2和Bzl，从而得到戈舍瑞林粗肽Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-Azgly-NH2甲醇溶液；

步骤九、将步骤八的氢化反应后的甲醇溶液过滤后得到995mL加入5倍量的纯水将样品析出离心得到纯度90%的戈舍瑞林粗肽固体

步骤十、制备得到醋酸戈舍瑞林。