异烟棒曲霉素C的制备方法
发布日期:2019/12/26 9:30:35
背景及概述[1]
据世界卫生组织(WTO)估计,每天约5万人死于感染性疾病。革兰阳性菌(如葡萄球菌和链球菌)是引起人类感染甚至导致死亡的主要致病菌。其中葡萄球菌可引起轻度皮肤脓疱症、呼吸道感染和脓毒症等多种疾病,严重者可导致死亡。肺炎链球菌主要引起急性呼吸道感染,如中耳炎、咽炎、鼻窦炎和肺炎等。此外,肺炎链球菌和其他链球菌也可引起皮肤感染、脑膜炎和脓毒症,这些感染性疾病给人类带来了极大的痛苦。目前针对革兰氏阳性菌感染的药物主要为抗生素类药物,如青霉素、头孢类、红霉素、喹诺酮类等药物。近年来致病菌的多重耐药性已严重影响抗菌药的临床疗效,革兰氏阳性菌耐药性问题尤为突出,以葡萄球菌、链球菌和肠球菌的耐药性最为常见和严重。如何克服抗生素耐药性,成为人们关注和研究的热点之一。如何更有效地解决这个问题,当务之急就是寻找并开发新型有效的抗菌药。本发明旨在提供一种具有抗革兰氏阳性菌活性的异烟棒曲霉素C(RoquefortineC)是一种具有较强的革兰氏阳性菌抑制活性的生物碱类化合物,可作为革兰氏阳性菌抑制剂用于由革兰氏阳性菌感染所导致的疾病的治疗,还可作为抑制革兰氏阳性菌的低分子生物探针,用于生命科学研究,为进一步研发新型抗菌药提供了备选药物。本发明从印度洋深海沉积物来源的青霉菌Penicilliumsp.Y32中,分离得到了异烟棒曲霉素C,通过反复实验、探索,得到了规模化生产异烟棒曲霉素C较佳的方法。
制备[1]
一种异烟棒曲霉素C的制备方法,包括如下步骤:
1)复苏固体培养基的配制:每升水中下列各组分按重量百分比为:麦芽浸膏1.5~1.8%、大豆蛋白胨0.15~0.35%、琼脂1.8~2.3%,该培养基的初始pH值为5.5~6.0;在生物安全柜中,将经过灭菌后的复苏培养基在温度大于40℃时,倒入经过灭菌的培养皿中,自然冷却备用;
2)液体发酵培养基的配制:每升水中下列各组分按重量百分比为:麦芽浸膏1.5~1.8%、大豆蛋白胨0.15~0.35%,该培养基的初始pH值为5.5~6.0;将该培养基倒入烧瓶中,封口、灭菌备用;
3)菌种复苏:取一定量的青霉菌Penicilliumsp.Y32,将其接种到步骤1所述的复苏固体培养基上,放入25℃~30℃恒温培养箱中,培养一至两天;
4)发酵培养:在生物安全柜中,将步骤3中在复苏固体培养基上培养出的菌种孢子,接种到步骤2所述的含有液体培养基的烧瓶中,在温度为25℃~30℃恒温静置培养25-35天;
5)过滤、萃取:将步骤4所得的菌液与菌丝体进行过滤、分离;取菌液,用1~2倍体积的乙酸乙酯,超声萃取三次;取菌丝体,先用80%丙酮水溶液浸泡2~4小时,超声、机械破碎,过滤后的混合液蒸发掉丙酮后,采用1~2倍体积的乙酸乙酯超声萃取三次;合并两者的乙酸乙酯萃取物;
6)粗制:将步骤5所得的乙酸乙酯萃取物进行浓缩,与100-300目的硅胶拌样;将拌样硅胶加到3倍体积的300-400目的硅胶柱层析上,依次使用二氯甲烷、60:1的二氯甲烷-甲醇、30:1的二氯甲烷-甲醇三种溶剂进行系统洗脱;将使用30:1的二氯甲烷-甲醇所得的洗脱液进行收集,并浓缩至固态,得到粗品;
7)精制:将上述粗品使用甲醇进行溶解、用滤膜过滤,滤液加载于高效液相色谱仪以一定的流速,进行分离纯化,洗脱溶剂使用80:20的甲醇-水,从而得到异烟棒曲霉素C。
主要参考资料
[1] CN201510203035.X一种异烟棒曲霉素C的制备方法
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