酵母菌属通用染料法荧光定量PCR试剂盒

试剂盒组成

2×SYBR qPCR MasterMix：0.5 mL/管（50次反应，20 μL体系）

荧光PCR专用模板稀释液：1 mL/管

超纯水：1 mL/管（用于稀释或对照设置）

染料法qPCR引物混合液：100 μL/管（针对酵母菌属保守序列设计，特异性高）

qPCR阳性对照（1×10^7 拷贝/μL）：50 μL/管

使用说明书：1份

注意事项：

不同批号试剂组分不可混用。

运输及保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

实验操作指南

1. 样品制备

样本数量：若检测N个样品，需额外设置2个对照（N+2），包括：

阳性对照（PC）：使用试剂盒提供的阳性对照（10 μL，1×10^6 拷贝/μL）加水至与样本体积一致。

阴性对照（NC）：以超纯水替代模板。

DNA提取：兼容多数细菌DNA提取试剂盒，需自备纯化试剂。

2. PCR反应体系（20 μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| 2×SYBR MasterMix | 10 |

| 引物混合液 | 0.4 |

| 模板DNA | 2-5 |

| 超纯水 | 补至20 |

3. 反应程序

预变性：95℃ 3分钟

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）

熔解曲线分析：60℃至95℃，每0.5℃递增，验证扩增特异性。

性能参数

灵敏度：可检测低至100拷贝/反应的酵母菌DNA。

特异性：引物针对酵母菌属高度保守区设计，无交叉反应。

线性范围：定量检测时覆盖5个数量级（10^2-10^7 拷贝/μL）。

注意事项

避免试剂污染，推荐在超净台或PCR工作站中操作。

熔解曲线出现多峰需排查非特异性扩增。

本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断。

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