藻胆荧光蛋白PE,APC和绿色荧光蛋白GFP比较|EnkiLIfe偶联标记

绿色荧光蛋白和藻胆荧光蛋白是细胞荧光实验中经常使用的两大类荧光蛋白，各自具有不同的特点。

它们的区别主要体现在以下几个方面：

1）核心本质不同：这是最根本的区别。

• FP是基因编码工具，其DNA序列可以被整合到宿主基因组中，在活细胞内自主产生荧光。

• R-PE和APC是提取纯化的生化试剂，需要偶联到抗体上，再通过抗原-抗体反应结合到目标分子上，通常用于对固定细胞或细胞表面进行染色。

2）光谱与亮度特性不同：

• 光谱：GFP及其衍生物覆盖蓝、青、绿、黄光谱；R-PE和APC的激发和发射波长更长，穿透力更强，受细胞自发荧光干扰更小。

• 亮度：R-PE是常用荧光标记里亮度最高的之一，其亮度可达FITC的5-10倍，非常适合检测低表达量的抗原。APC亮度也很高，且背景低。GFP的亮度通常不及R-PE。

  

3）应用场景侧重点不同： 需要在活体、活细胞中实时、动态观察蛋白质行为、细胞命运或基因表达时，GFP及其衍生物是不可替代的工具。 在进行高通量、高灵敏度的体外检测，如流式细胞术分析细胞表面标志物、分选特定细胞群时，R-PE和APC偶联的抗体是金标准之一。它们不适用于活细胞成像。

4）荧光产生的结构基础不同：

• GFP及其衍生物产生荧光的基础来源于其自身的紧邻的三个核心氨基酸组成的化学结构形成的大π键， 因此特别适合进行基因重组的融合蛋白表达；

• R-PE和APC等藻胆蛋白的荧光基础来源于不同种类和数量的藻胆色素在蛋白骨架及其亚基单位上的组合方式，最开始是作为某些光能自养型藻类进行光合作用的基本单位，融合基因重组表达通常有一定的难度，因此其通常是在含有此蛋白的藻类经化学提取纯化而来。

💡 如何选择？

你应根据具体的实验目的来决定：

1）想研究活细胞内某蛋白的动态过程？ 选择 GFP，构建融合基因载体。

2）想做流式细胞术，分析细胞表面多个抗原，且某个抗原表达很弱？ 选择 R-PE 偶联的抗体，利用其高亮度。

3）想做多色流式，需要远红色通道且背景低的染料？ 选择 APC 偶联的抗体。

4）实验需要同时进行活细胞成像和流式分析？ 可以结合使用。例如，用GFP标记靶细胞进行示踪，再用APC偶联的抗体通过流式鉴定其表面分子。

总之，GFP与R-PE/APC代表了荧光标记技术的两大路径：基因编码的体内探针和化学偶联的体外探针。它们各有优劣，互为补充。

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