TRAP染色:破骨细胞检测的“金标准”| 仿若粉雾与冰蓝私语

🦴 实验干货｜破骨细胞检测"金标准"TRAP染色全攻略

✨ 做骨代谢研究的你是不是还在愁怎么鉴定破骨细胞？ 😣

今天分享一个我做了无数次才总结出的TRAP染色protocol，建议先⭐收藏再看！

🔬 什么是TRAP？

抗酒石酸酸性磷酸酶（Tartrate-Resistant Acid Phosphatase）是破骨细胞的特异性标志酶！ 原理简单说：破骨细胞在酒石酸存在下，能把萘酚AS-MX磷酸盐水解成萘酚，再与副品红偶联形成酒红色沉淀～

💡 为什么不用普通AP染色？

普通成骨细胞也会被染出来！只有破骨细胞的酸性磷酸酶能抵抗酒石酸抑制，这是关键区分点！

🎯 适用场景（对号入座）

✅ 骨质疏松/骨硬化症机制研究

✅ 牙槽骨吸收（口腔医学必做）

✅ 假体周围骨溶解评估

✅ 任何需要定量破骨细胞数量的实验

⭐如何量化

以2个量化指标为例：1. 破骨细胞数量 TRAP+ 多核细胞数：计数含有 ≥3个细胞核 且TRAP染色呈强阳性的细胞。2.破骨细胞表面覆盖度：破骨细胞数量除以所分析的骨表面周长。单位：个/mm。可以使用ImageJ软件进行分析。

💪 进阶技巧：ImageJ计数时，用Color Deconvolution插件分离红色通道，定量更准确！

📝 关键步骤避坑指南

1️⃣ 样本处理（成败关键！）：最好用冰冻切片！石蜡包埋会把酶活性搞丢😭 切片厚度8-10μm，贴片后-20℃保存别超过2周 。

2️⃣ 孵育条件：37℃湿盒孵育45-60min（别省时间！） 避光！避光！避光！💡重要的事说三遍 。

3️⃣ 显色控制：出现酒红色就可以停，一般30s-2min⏱️ 染过头背景会很脏 。

🔍 结果判读

✅ 阳性细胞：胞浆内酒红色颗粒，多核（3个以上）。

❌ 阴性对照：酒石酸缓冲液换成醋酸缓冲液，应该无色 。

⚠️ 常见翻车现场

🔸 全片都红：底物浓度太高或孵育太久。

🔸 染不上色：样本冻存太久/固定液用错（必须用丙酮或甲醛短时间固定） 。

🔸 背景深：未充分洗涤 。

💬 灵魂拷问：你做TRAP染色时遇到过细胞双核但染不上色的情况吗？

🤔 欢迎评论区咨询交流！

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