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发布人:上海优宁维生物科技股份有限公司
发布日期:2025/1/26 13:10:58
CBA原理介绍:
Cytometric Bead Array(CBA),也就是细胞因子微球检测技术,是依托流式细胞检测体系的多重蛋白定量检测手段,能够在单一样品里同步检测多个指标。BD 公司巧妙借助流式细胞仪可对荧光信号进行级数放大的特质,把待检测的可溶性因子附着于直径近似细胞的微粒之上,以此达成对受检样品内各类可溶性因子的检测目的。
CBA 的基本原理和 ELISA 检测较为相似,即运用微小且分散的颗粒来捕获液体待测物,然后凭借流式细胞仪检测类似 “三明治” 结构的颗粒 - 待测物复合体所释放的荧光,进而确定待测物的数量。
CBA详细介绍:
CBA 的微球尺寸均一,具备特定的荧光强度,其表面包被有适用于特定分析(比如其他抗体或者可溶性蛋白)的特异性捕获抗体,这就如同 ELISA 孔板的捕获表面。当微球与待测样品溶液相混合时,微球上的特异性抗体便会和样品(血清、血浆或者细胞培养液)里对应的抗原或蛋白相结合,接着加入带有荧光标记的检测抗体,如此便会形成 “三明治” 夹心复合物。最后借助流式细胞仪针对特异性目的蛋白实施检测。CBA 的每种微球都携带着不同强度的红色荧光,在流式细胞仪的 FL3 通道通过检测微球荧光强度的差异来定性目的蛋白;检测抗体则带有 PE 荧光素标记,在流式细胞仪的 FL2 通道进行检测,依靠检测抗体的 PE 荧光强度来定量目的蛋白。
CBA技术特点:
CBA 技术具有诸多特点:它拥有流式细胞仪宽范围荧光检测的特性,对样本的需求量极少,检测更为迅速且精准。具体而言:其一,能够轻松达成多重检测,单个样本里最多可对 75 个目的蛋白进行精确的定量分析。其二,样本所需量极小,仅需 50μL 溶液就能开展一次检测。其三,具备更高的灵敏度,分析灵敏度可高达 2.8pg/mL。其四,灵敏度更高、检测范围更宽且重复性更佳。CBA 技术能使蛋白定量的分析灵敏度达到 pg/ml 级别,检测范围为 0 - 5000pg/ml,并且所有分析仅需一组标准曲线。依据抗体的荧光强度来定量目的蛋白,有效避免了 ELISA 反应中因酶联放大而产生的假阳性。其五,检测对象可灵活组合,即 BD CBA Flex Set。CBA 试剂盒是同时检测已配好的 6 个指标,形式相对固定。为满足不同客户的实际需求与研究兴趣,BD 在 2005 年初推出了 CBA Flex set。它打破了 CBA 试剂盒的固定模式,转变为可自由组合、灵活搭配的形式。使用者能够依据自身需要组合不同的捕获微球来检测多个指标,最多能同时检测 75 个指标。除了具备 CBA 试剂盒的优势外,Flex Set 还配备了独立的软件分析系统(CBA Flex Set Analysis Software),并且能够在 BD FACSArray Bioanalyzer 上直接采用 96 孔和 384 孔板进行操作。CBA Flex set 给予研究者更为灵活、自由的选择空间,进一步丰富了 CBA 产品线,其种类涵盖免疫、细胞信号传导、细胞凋亡等诸多领域的蛋白定量分析。其六,操作简便,省时省力。CBA 技术采用芯片式集成测定,所有检测仅需一组标准曲线,就能计算出每种待测蛋白的浓度;操作流程简单,整个过程仅需 3.5 小时,还可对待测样本进行实时分析,缩减了检测时间,提升了检测效率。其七,拥有强大的软件分析系统。BD CBA 软件的数据处理能力极为强大,能够直接将目标蛋白的检测结果换算成标准浓度;除了为用户提供待测物的计数结果外,还能提供可视轮廓或信号图形,以辅助用户获取更多信息。该软件有适用于 Macintosh 和 Microsoft 系统的两个版本可供选择。与传统的液相蛋白定量技术相比,CBA 技术属于一种 “多元” 且 “同步” 的检测技术。
CBA方法与Elisa方法的优势:
样本量需求极为精简:仅需 25 微升样本,便可同时对多个因子展开检测。
数据精准且可靠:源自同一份样本的多个因子检测结果,相互印证,可信度高。
检测速率高效快捷:能够同时检测多个因子,极大地节省了检测时间成本。
检测范围广泛全面:涵盖多种类型因子,满足多样化检测需求。
成本效益优势显著:随着检测因子数量增多,单个因子的平均检测成本大幅降低,性价比极高。
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