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发布人：上海西格生物科技有限公司
发布日期:2025/12/16 9:02:46
ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种高灵敏度的检测技术，其原理依赖于抗原-抗体的特异性结合及酶促反应的信号放大。这种高灵敏度在提升检测能力的同时，也使其极易受到各类污染的干扰。任何非目标物质与固相载体、抗体或酶标二抗发生非特异性结合，都可能被最终显色系统放大，从而显著影响结果的准确性。
污染类型与影响
ELISA实验中常见的污染源及其影响如下表所示：
污染类型
具体来源
对实验的影响
样本相关污染
溶血（红细胞破裂释放血红蛋白）
血红蛋白具有过氧化物酶活性，会催化底物显色，造成非特异性显色和假阳性。
样本被细菌污染
菌体可能含有内源性辣根过氧化物酶（HRP），导致非特异性显色和假阳性。
高脂血症（脂肪含量过高）
干扰抗原抗体反应，可能导致假阴性；取样时应避免吸取上层脂肪层。
使用含叠氮钠（NaN₃）的抗凝剂
NaN₃可抑制辣根过氧化物酶（HRP）的活性，从而降低检测信号，影响灵敏度。
试剂与操作污染
吸头重复使用或未洗净
易造成交叉污染，是导致“花板”（跳孔）现象的常见原因。
底物或显色剂受污染/避光不当
可能提前显色或产生异常颜色，导致结果无效。
不同批次或不同品牌试剂混用
可能因组分不匹配导致反应异常，出现白板或假阳性。
如何最大限度减少污染风险？
1、严格使用一次性耗材：每次加样必须更换新的、密封性好的吸头，封板膜也应一次一换，杜绝交叉污染。
2、规范洗涤操作：确保每一步洗涤都充分且彻底。手工洗板时，要注满每个孔，静置15-30秒后再甩干，并在干净的吸水纸上拍干，防止残留。定期检查洗板机冲洗头是否通畅。
3、正确处理试剂与样本：
所有试剂和样本在使用前需平衡至室温，以减少冷凝水带来的潜在污染风险。
避免在样本中使用叠氮钠(NaN₃)作为防腐剂，因为它会抑制辣根过氧化物酶(HRP)的活性，导致假阴性。
严重溶血或脂血的样本不推荐使用，因其含有可催化底物的物质，易产生假阳性。
4、注意实验环境：在洁净、稳定的环境中操作，避免阳光直射和高温，以防试剂降解。
总之，进行ELISA实验时，必须将“防污染”作为核心原则贯穿始终。从样本采集、储存到加样、洗涤的每一步，都应保持高度警惕。建议设置严格的阳性和阴性对照，以便及时发现并排查由污染引起的异常结果。
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