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发布人：上海西格生物科技有限公司
发布日期:2026/1/4 9:31:03
ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种高灵敏度的免疫检测技术，广泛用于科研和临床检验。其中，加样作为实验的第一步，直接影响抗原抗体反应的起始条件。若操作不当，可能引发假阳性、假阴性或数据重复性差等问题。
加样操作核心要点
1、加样位置：应将液体加在微孔板孔底，避免接触孔壁上部，以防非特异性吸附。
2、加样角度：推荐以45°角贴壁加入，既可防止液体残留于吸头，又能避免溅出或产生气泡。
3、控制流速：吸取和释放液体时动作要缓慢平稳，过快易导致气泡形成或加样不准。
4、避免交叉污染：
每次吸取不同样本或试剂后必须更换枪头，即使是在添加标准品时也需如此。
使用全自动加样系统时，建议采用一次性加样针，防止“拖带现象”造成的假阳性。
5、防止气泡：加样后检查孔内是否有气泡，若有应轻敲板子去除，否则会影响OD值读数。
6、精确量程匹配：选用与所需体积接近的移液器，减少误差；例如加50μl应使用50–200μl量程的枪。
常见错误及后果对照表
错误操作
可能后果
解决办法
加样过快或垂直滴加
液体飞溅、产生气泡、加样不准
缓慢释放，45°贴壁加样
吸头触及孔底或孔壁
损伤包被层、压弯吸头
保持适当距离，不触碰孔底
未更换枪头
样本间交叉污染，出现假阳性
每次换样本/试剂均更换新枪头
使用固定钢针全自动系统
导致“拖带现象”，强阳性影响后续样本
改用一次性加样针
加样后未及时孵育
特别是高温环境下，可能导致反应提前或蒸发
加样后立即放入孵箱
补充说明:部分试剂盒支持“一步法”加样，如将样本与检测抗体同时加入，简化流程的同时也能降低多次操作引入的误差。
建议
为保障加样准确性，建议做到以下几点：
所有试剂和样本在使用前平衡至室温（20–25℃），防止冷凝水影响反应。
使用校准过的微量移液器，并定期维护，确保精度。
对于大批量样本，采取分批操作，避免因等待时间过长而影响反应一致性。
每次实验设置空白调零孔和双复孔，提高数据可靠性
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