8-溴膘苷

58-61-7

2946-39-6

以(2R,3R,4S,5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇为原料，合成(2R,3R,4S,5R)-2-(6-氨基-8-溴-9H-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇的一般步骤如下：实施例1：修饰的siRNA分子的合成涉及8-甲氧基腺苷亚磷酰胺的制备及其在胱天蛋白酶2 siRNA反义链中的掺入。图7A展示了双链阳性对照siRNA（SEQ ID NO:20（上链）和SEQ ID NO:21（下链））与双链阴性对照siRNA（SEQ ID NO:22（上链）和SEQ ID NO:23（下链））的结构。图7B展示了单独修饰的siRNA的示意图，其中修饰包括但不限于8-丙二酰氧基腺苷、8-苯乙氧基腺苷和8-环己基乙氧基腺苷。在图7B中，4AS对应SEQ ID NO:24，6AS对应SEQ ID NO:25，10AS对应SEQ ID NO:26，15AS对应SEQ ID NO:27。腺苷的溴化反应在化学领域已有报道；通常，使用四倍过量的溴可得到约75%至82.5%的8-溴腺苷产率。在核-亚磷酰胺的合成过程中，为保护2'-OH基团，首先对N'-苯甲酰腺苷的5'-OH进行保护。随后，使用叔丁基二甲基甲硅烷基氯（TBDMS-Cl）保护2'-OH。虽然添加Ag+离子有助于减少3'-OH的不必要反应，但通常仍会发生副反应，导致总产率显著降低。因此，为提高总产率，采用了一种新型保护基团二丁基甲硅烷基二硅酸酯（DTBSDT），可同时保护5'-OH和3'-OH，并使2'-OH易于被TBDMS-Cl保护。这两个反应基本上为一锅反应，避免了繁琐的分离步骤。反应接近定量，产物收率约为96%至98%（参见图3和图4）。在甲醇中，使用甲醇钠试剂合成甲氧基衍生物，得到8-甲氧基腺苷衍生物及8-氧代腺苷衍生物。这两种衍生物的分离较为复杂，所需化合物的产率低于50%。因此，通过使n-BuLi与过量的无水甲醇反应，原位生成甲氧基阴离子，该反应效率更高，所需产物的产率约为85%至93%。使用特殊的氟化物试剂HF-吡啶在零下温度下完成5'-OH和3'-OH的脱保护。这些DMT反应的产物收率较低，约为40%至50%。亚磷酰胺合成步骤的产物收率约为95%至98%。随后，将8-甲氧基腺苷亚磷酰胺掺入反义链的第9或14位（分别对应有义链的第11和6位），或同时掺入第9和14位。腺苷8位的炔丙基部分可简化其他8位取代腺苷类似物的合成。siRNA中的8-炔丙基腺苷的炔基部分可与合适的水溶性叠氮化物通过“点击”反应，形成所需的小沟修饰。

参考文献：

[1] Journal of Organic Chemistry, 2014, vol. 79, # 21, p. 9992 - 9997

[2] European Journal of Organic Chemistry, 2009, # 10, p. 1515 - 1521

[3] Patent: WO2011/119674, 2011, A1. Location in patent: Page/Page column 50-51

[4] Journal of the American Chemical Society, 2012, vol. 134, # 42, p. 17643 - 17652

[5] Synthesis, 2004, # 17, p. 2799 - 2804