阿洛司他丁

Aloxistatin (E64d) 是一种不可逆的膜透过性cysteine protease抑制剂，具有抑制血小板聚集的活性。SARS-CoV-2病毒入侵需要半胱氨酸蛋白酶cathepsin L，而aloxistatin处理可以有效减少92.3%的SARS-CoV-2病毒颗粒的细胞入侵。

Target	Value
Cysteine protease

Aloxistatin可以进入完整的血小板，通过抑制钙蛋白酶而抑制蛋白质水解。 Aloxistatin减弱体外甲状旁腺激素诱导的细胞增殖，并且抑制成骨细胞分化。

Aloxistatin (100 毫克/千克，p.o.)强烈抑制仓鼠骨骼肌、心脏和肝脏中组织蛋白酶B&L的活性。在脊椎损伤（SCI)的大鼠体内，Aloxistatin在SCI病变和半影区提供神经保护。 在阿尔茨海默氏病动物模型中，Aloxistatin通过抑制组织蛋白酶B的活性减少了大脑淀粉样蛋白-β，并改善了记忆障碍。 一种cysteine protease(半胱氨酸蛋白酶)抑制剂。
The compound can permeate an intact cell and block the activity of calpain, which results in the protection of protein kinase C (PKC) from proteolysis. E-64-d is also a cathepsin B, cathepsin H, and cathepsin L inhibitor. Research shows that E-64-d can enhance compromised natural killer cells and bactericidal activity of leukocytes. In addition, E-64-d has been shown to induce cell cycle arrest during prophase and metaphase in Xenopus embryonic cells.

以rel-(2R,3R)-3-(乙氧羰基)环氧乙烷-2-羧酸和N1-异戊烷-L-亮氨酰胺为原料，合成(2S,3S)-3-(((S)-1-(异戊基胺基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨甲酰)环氧乙烷-2-羧酸乙酯的一般步骤：在氮气保护下，将(2S,3S)-3-(乙氧基羰基)环氧乙烷-2-羧酸（25g，0.16mol）和(S)-1-(异戊基氨基)-2-氨基-4-甲基-1-氧代戊烷盐酸盐（38g，0.16mol）溶解于二氯甲烷（750mL）中，冷却至0℃（冰水浴）。随后加入2-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐（65g，0.17mol）和二异丙基乙胺（DIPEA，56mL，0.31mol）。反应混合物在0℃下搅拌1小时后，移除冰浴，继续在室温下搅拌2小时。反应完成后，用二氯甲烷（750mL）稀释反应混合物，依次用饱和碳酸氢钠溶液（2次）和饱和氯化钠溶液（1次）洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到黄色粘稠油状粗产物。粗产物通过硅胶柱（60mm×300mm）纯化，用10%至50%乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱。收集合并洗脱液（2.5L），减压浓缩得到白色固体E64d（53g，收率100%）。将E64d（36g）在1%乙醇的甲基叔丁基醚（MTBE，535mL）中重结晶，得到白色短针状晶体E64d（25g，收率69%），熔点为123-124℃。1H NMR（500MHz，CDCl3）δ6.68（d，J=8.4Hz，1H），6.08（br s，1H），4.36-4.40（m，1H），4.21-4.28（m，2H），3.67（d，J=1.9Hz，1H），3.46（d，J=1.9Hz，1H），3.19-3.30（m，2H），1.49-1.65（m，4H），1.38（q，J=7.4Hz，2H），1.30（t，J=7.0Hz，3H），0.89-0.93（m，12H）；ESI MS m/z 343.2（M+H）+；元素分析（C17H30N2O5）符合理论值；HPLC纯度符合要求。

参考文献：

[1] Patent: US2017/166543, 2017, A1. Location in patent: Paragraph 0056; 0057; 0059; 0072; 0073