HK-2人肾小管上皮细胞

HK-2人肾小管上皮细胞源于正常肾的近曲小管细胞，通过导入HPV-16E6/E7基因而获得永生化。将含有HPV-16E6/E7基因的重组的逆转录病毒载体pLXSN16E6/E7转染外生包装细胞Psi-2，Psi-2细胞产生的病毒再去感染兼嗜性包装细胞系PA317，将PA317产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。尽管pLXSN16E6/E7中含有新霉素抗性，但未用G418筛选转导克隆。Southern和FISH分析显示HK-2细胞来源于单克隆。PCR检测证实HK-2细胞基因组中含有E6/E7基因。 HK-2细胞属源于正常肾的近曲小管细胞，通过导入HPV-16 E6/E7基因而获得永生化。将含有HPV-16 E6/E7基因的重组的逆转录病毒载体pLXSN 16 E6/E7转染外生包装细胞Psi-2；Psi-2细胞产生的病毒再去感染兼嗜性包装细胞系PA317，最后将PA317细胞产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。尽管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性，但未用G418筛选转导克隆。Southern和FISH分析显示，HK-2细胞来源于单克隆。PCR检测证实，HK-2细胞基因组中含有E6/E7基因。HK-2细胞保留了指示分化良好的PTCs的表型，细胞碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转肽酶、亮氨酸氨基肽酶、酸性磷酸酶、细胞角蛋白、α3、β1整合素和纤维连接蛋白呈阳性，因子VIII相关抗原、6.19抗原和CALLA内肽酶呈阴性。HK-2细胞还保留了近端肾小管上皮的功能特征，如Na+依赖性/根皮苷敏感性糖转运和腺苷酸环化酶对甲状旁腺的反应性，但对抗利尿激素的反应性。HK-2细胞能够进行糖异生，其制造和储存糖原的能力证明了这一点。HK-2细胞是贴壁依赖性的，不会在甲基纤维素、软琼脂或悬浮液中生长。HK-2细胞可以重现用新鲜分离的PTC获得的实验结果。HK-2细胞在毒理学研究中有应用。

1.显微镜观察细胞，当细胞融汇至80%左右（可以传代的情况下），细胞应该在2.37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度，培养瓶应预留一部分培养基继续培养。

2.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。

3.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。

4.1000rpm,5min离心，重悬细胞。换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO2培养。

上皮细胞样(卵圆形、梭形或多角形) 1.尽量吸干净T25瓶原培养基；2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层；4.将培养瓶放入37度培养箱消化；5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） 肾小管；上皮细胞；HPV16转化；男性；成年 贴壁细胞