HK-2人肾小管上皮细胞

HK-2人肾小管上皮细胞源于正常肾的近曲小管细胞，通过导入HPV-16E6/E7基因而获得永生化。将含有HPV-16E6/E7基因的重组的逆转录病毒载体pLXSN16E6/E7转染外生包装细胞Psi-2，Psi-2细胞产生的病毒再去感染兼嗜性包装细胞系PA317，将PA317产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。尽管pLXSN16E6/E7中含有新霉素抗性，但未用G418筛选转导克隆。Southern和FISH分析显示HK-2细胞来源于单克隆。PCR检测证实HK-2细胞基因组中含有E6/E7基因。

1.显微镜观察细胞，当细胞融汇至80%左右（可以传代的情况下），细胞应该在2.37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度，培养瓶应预留一部分培养基继续培养。

2.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。

3.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。

4.1000rpm,5min离心，重悬细胞。换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO2培养。