HK-2人肾小管上皮细胞的应用

背景^[1-3]

HK-2人肾小管上皮细胞源于正常肾的近曲小管细胞，通过导入HPV-16E6/E7基因而获得永生化。

将含有HPV-16E6/E7基因的重组的逆转录病毒载体pLXSN16E6/E7转染外生包装细胞Psi-2，Psi-2细胞产生的病毒再去感染兼嗜性包装细胞系PA317，将PA317产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。尽管pLXSN16E6/E7中含有新霉素抗性，但未用G418筛选转导克隆。Southern和FISH分析显示HK-2细胞来源于单克隆。PCR检测证实HK-2细胞基因组中含有E6/E7基因。

HK-2人肾小管上皮细胞

培养步骤：

1.显微镜观察细胞，当细胞融汇至80%左右（可以传代的情况下），细胞应该在2.37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度，培养瓶应预留一部分培养基继续培养。

3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。

4.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。

5.1000rpm,5min离心，重悬细胞。换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO2培养。

应用^[4][5]

用于铅致人肾小管上皮细胞HK-2凋亡、转分化研究以及铅结合蛋白分离鉴定研究

以正常人肾小管上皮细胞系（HK-2）为研究对象,观察醋酸铅致HK-2细胞凋亡、转分化作用,其剂量反应关系,以及对细胞凋亡、转分化信号通路相关分子的影响和碘化钾的干预作用。

在此基础上,运用功能蛋白质组学方法,分离鉴定与铅有高亲和性的结合蛋白,探讨铅致HK-2细胞凋亡、转分化的内在原因。以往的研究显示,铅可在细胞内与蛋白质形成高亲和性的铅结合蛋白（PbBPs）,PbBPs的形成与铅在肾脏引起的一种特征性病理改变-肾小管上皮细胞质、细胞核内形成包涵体有关。

研究提示,铅穿过细胞膜,在细胞内沉积、迁移以及发挥其毒作用,是以铅结合蛋白结合的形式来进行的。所谓铅结合蛋白是指与铅有高亲和结合能力,与细胞对铅的适应性、反应性相关的细胞内铅受体和靶点蛋白质。

铅刺激HK-2细胞出现凋亡、转分化时,是否有PbBPs参与其中起了什么作用?在肾小管上皮细胞凋亡、转分化细胞模型上分离鉴定PbBPs,将可能弄清楚铅致细胞凋亡、转分化的真正原因所在,明了细胞内的分子靶点。并有可能找到新的高亲和性的PbBPs,为开发铅蛋白质络合剂药物提供证据。

以出现明显凋亡、转分化的HK-2细胞为研究对象,采用铅亲和柱一金属螯合亲和层析、一维SDS-PAGE电泳分离、ESI-MS/MS液-质联用串联质谱鉴定混合蛋白质样品,免疫印迹法验证,这种功能蛋白质组学方法筛选与HK-2细胞凋亡、转分化相关的铅结合蛋白,用生物信息学方法分析铅结合蛋白在铅致HK-2细胞毒效应中的可能作用。

参考文献

[1]PINK1 Protects against Oxidative Stress by Phosphorylating Mitochondrial Chaperone TRAP1[J].Julia W Pridgeon,James A Olzmann,Lih-Shen Chin,Lian Li.PLOS Biology.2007(7)

[2]Characterization of the sterol-binding domain of oxysterol-binding protein（OSBP）-related protein 4 reveals a novel role in vimentin organization[J].Jessica P.Wyles,Ryan J.Perry,Neale D.Ridgway.Experimental Cell Research.2007(7)

[3]Changes in expression of fibrotic markers and histopathological alterations in kidneys of mice chronically exposed to low and high Cd doses[J].Sandy Thijssen,Ivo Lambrichts,John Maringwa,Emmy Van Kerkhove.Toxicology.2007(2)

[4]Changes in Systolic Blood Pressure Associated With Lead in Blood and Bone[J].Barbara S.Glenn,Karen Bandeen-Roche,Byung-Kook Lee,Virginia M.Weaver,Andrew C.Todd,Brian S.Schwartz.Epidemiology.2006(5)

[5]周桂凤.铅致人肾小管上皮细胞HK-2凋亡、转分化研究以及铅结合蛋白分离鉴定[D].中南大学,2008.