银杏叶提取物

银杏叶提取物为银杏科银杏属植物银杏(GinkgobilobaL.)的干燥叶提取物，主要成分为黄酮类和萜内酯，具有多种保健功能，广泛应用于食品及化妆品。

银杏叶化学成分十分复杂，从中分离出化合物有140余种，黄酮类化合物和萜内酯类化合物是银杏叶两种主要活性成分。银杏黄酮又称单黄酮，以山奈素、槲皮素及异鼠李素的苷为主；银杏萜内酯属于萜类化合物，由倍丰萜内酯和二萜内酯组成，又以白果内酯及银杏内酯为主。此外还含有聚戊烯醇、有机酸、多糖、氨基酸、酚类及微量元素等。 银杏是古老而原始的孑遗物种，在地球上生长了大约2亿年，有“活化石”之称。中国是银杏的故乡，目前中国的银杏资源占全世界的70%。银杏作为中草药在民间使用，最早见于十四世纪的《日用本草》，主要用于常用于咳嗽、气喘及炎症。
银杏又名鸭脚、公孙树、鸭掌树。为落叶乔木，高可达40m。树干直立，树皮灰色。枝有长短两种，叶在短枝上簇生，在长枝上互生。叶片扇形，长4～8cm，宽5～10cm。银杏的种子名叫白果。
银杏分布在北纬19°40～43°40，东经97°00～126°30，年平均温度14℃～18℃，冬春温凉，夏秋温暖湿润的气候条件下生长良好，在严寒的冬季(-20℃以下)易受冻害，在常夏无冬的热带生长不良。银杏在我国分布广泛，分布于我国中部至西部，北起辽宁，南至广东，东到台湾，西至青海均有种植，以江苏、山东、浙江、湖北居多，现在日本、美国也有引种。

图1为银杏叶及其种子（白果）。

银杏叶提取物的生物活性多种多样。在动物研究中，银杏叶提取物似乎可使调节躯体感觉处理和警觉的脑区减少葡萄糖利用，抑制应激诱导的皮质类固醇释放预防小鼠海马体的年龄相关变化。其他动物研究表明，银杏叶提取物可抑制一氧化氮，引起血管舒张，可逆地抑制脑单胺氧化酶A和B，还可能清除自由基，而自由基可能是阿尔茨海默病中脂质过氧化反应和细胞损伤的介质。还有研究发现银杏叶提取物具备抗氧化作用，可抑制乙酰胆碱酯酶。

银杏叶提取物是目前治疗心脑血管类疾病的常用中药，有效成分主要是银杏黄酮类和银杏二萜内脂类化合物，其中银杏黄酮苷类成分主要包括槲皮素、山奈酚、异鼠李素。银杏二萜内脂类成分主要包括银杏内酯A、B、C、J、M及白果内酯。
银杏叶提取物具有抗氧化活性、心血管活性、抗炎活性及抗肿瘤的活性作用，能扩心脑血管及动脉血管，同时对微血管也有很好的保护作用，有效防止血管血管堵塞，对于高血脂、高血压、糖尿病等症状有很好的防治作用，间接的降低了常见眼疾病（白内障、青光眼、玻璃体浑浊、视网膜病变、糖尿病并发性眼疾病等常见眼病）的发病机率，能有效净化血液、强化血管，防治心学管疾病，而且对脑的障碍有效、抗衰老、预防癌症。最近10年，美国消费者一直将银杏叶产品作为防止中风与冠心病的保健食品服用。近据美国医学杂志报道，美国俄勒冈州立大学医学系的研究人员在长达3年多时间的临床研究中发现，65岁以上老人常年口服银杏叶制剂可有效预防记忆力退化和阿尔茨海默病。 据不完全统计，目前国际上标准银杏叶提取物是按德国Schwabe专利工艺生产的EGb761，外观为棕黄色粉末，略有银杏叶香味。银杏叶提取物是以银杏GinkgobilobaL.的叶为原料提取的产品，商品提取物通常标化为含黄酮醇苷24%、银杏萜内酯6%。
银杏叶提取物的生产工艺文献报道的方法较多，主要有丙酮提取-铅盐沉淀法、乙醇提取-大孔树脂吸附分离法、超临界二氧化碳萃取法、醇提取-萃取-色谱分离法等，国内应用较多的为乙醇提取-树脂分离法。
目前国内外使用最广泛的方法就是有机溶剂提取法。由于其他有机溶剂有毒性或挥发性较大，因此一般采用乙醇作为萃取剂。张永红等经实验表明提取银杏叶中黄酮类化合物的较佳条件为70%乙醇做提取液，提取温度90℃，料液比为1：20，提取次数为3次，每次回流1.5h。
1. 乙醇提取-大孔树脂吸附分离法
拣除杂质和霉叶，洗净，切碎，用70%乙醇回流提取，分取提取液，滤过，减压回收乙醇，高速离心分离去渣，加适量纯水稀释，加入至大孔吸附树脂柱，水洗脱至洗脱液清亮色淡，再用一定浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，真空干燥即得。
2. 丙酮提取-氢氧化铅沉淀法
银杏叶用60%丙酮提取，冷却后过滤，用四氯化碳萃取提取液，加入丁酮并混匀，分离析出丙酮-丁酮相，在酮相中再加入固体硫酸氨搅拌，滤去固体物质，减压蒸发滤液至含浓度为含固形物20%-60%，用50%变性乙醇稀释至浓度为含固形物10%。加入氢氧化铅悬浮液，滤去沉淀。将滤液减压浓缩至一半体积，然后在搅拌下于浓缩液中加入硫酸氨和丁酮，搅拌结束后析出丁酮-乙醇相；从水相中分出丁酮-乙醇相，再在水相中加入丁酮，搅拌，析出丁酮-乙醇相，合并于上述丁酮-乙醇相中。搅拌下加入硫酸氨，混合后分离析出的水相，用硫酸钠干燥丁酮-乙醇相，减压蒸发至干，用变性乙醇溶解变性粘稠的残液，放置12小时分离析出的沉淀，减压蒸发，真空干燥即得。

早在20世纪60年代初，国外已用银杏叶提取物治疗脑血管疾病和神经系统疾病，其疗效显著且无副作用。银杏提取物具有很强的抗氧化作用，能清除体内过剩自由基，阻止体内脂质过氧化，可扩张冠脉血管，增加脑血流量，增强血小板活化因子拮抗作用，可治疗血管老化、脑血管供血不足及其他神经系统疾病。此外，还有提高机体免疫力，延缓衰老等作用。
1.对心血管系统的作用
银杏叶提取物能抑制正常人血清中的血管紧张素转换酶(ACE)的活性，从而抑制小动脉收缩，扩张血管，增加血流量。银杏萜内酯是具有高度专属性的PAF受体阻断剂，银杏叶提取物或银杏萜内酯能抑制血小板的活化因子(PAF)和环氧化酶或脂氧化酶。银杏叶提取物很好地被耐受了且拮抗血小板由PAF引起的聚集，但对ADP引起的聚集无效果。
2.对中枢神经系统的作用
银杏叶提取物通过抑制PAF的作用而影响内分泌系统及影响免疫系统与中枢神经系统的相互作用，能够促进大脑循环代谢，改善记忆功能。改善由NaNO2所致的缺型记忆损伤外，其抗缺氧作用可能与其增加脑血流量和改善缺氧时脑能量代谢有关。银杏苦内酯B能用于中风的临床治疗。
3.对消化系统的作用
银杏叶提取物能显著改善PAF和内毒素所致鼠胃、肠溃疡，并能部分抑制乙醇对胃的损伤。对肝硬变有潜在治疗作用。银杏萜内酯B在治疗急性胰腺炎中可能有作用。
4.对呼吸系统的作用
银杏叶的乙醇提取物对气管平滑肌具有直接松弛作用。雾化银杏叶提取物的吸入不仅抑制支气管收缩作用，而且抑制了PAF所致的白血细胞和嗜酸性细胞减少，银杏叶提取物在抑制和治疗支气管高反应性中有重大意义。
5.抗衰老作用
银杏叶中的银杏双黄酮、异银杏双黄酮、银杏素及槲皮素，均有抑制脂质过氧化作用，特别是槲皮素具有更强的抑制活性。
7.在移植排斥及其它免疫反应中的作用
银杏叶提取物可以延长移植皮肤、异位心脏异种移植、正位肝异种移植的存活时间。银杏叶提取物能抑制人体对KC526目标细胞的自然杀伤细胞活性，也能阻止干扰素引起的自然杀伤细胞活性。
8.抗肿瘤作用
银杏叶绿叶粗提物即脂溶性部分能抑制EB病毒，十七碳烯水杨酸、白果黄素(Bilo-betin)均有很强的抑制活性；银杏总黄酮能增加荷瘤小鼠胸腺重量及SOD活性水平，调动机体内在的抗肿瘤能力；槲皮素与杨梅黄素能抑制致癌物的发生。
9.抗氧化作用
银杏叶提取物可直接清除脂质自由基、脂质过氧化自由基和烷自由基等，终止自由基连锁反应链。同时还可参与调节和提高过氧化物歧化酶，谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶的活性。EGB中黄酮类物质的抗氧化作用甚至超过维生素，且在体外具有抗自由基攻击性质。

1.黄酮的药代动力学
银杏黄酮类化合物主要是以苷元的形式被吸收，在血浆、尿液中几乎检测不到银杏黄酮的苷或苷元形式，其主要存在形式为苷元的葡萄糖醛酸结合物或硫酸结合物。同时，也有文献报道血浆或尿液经过水解后能检测到银杏黄酮苷元，不同的结论可能是由分析仪器及方法的灵敏度引起，但同时也揭示出银杏黄酮类成分的生物利用度较低。
银杏黄酮苷类在体内代谢主要有2个部位：一是肝脏，在肝脏CYP450作用下发生一系列反应，生成水溶性更高的代谢物排出体外；二是肠道，在肠道菌群的作用下，将其水解为苷元。与银杏萜内酯类成分激活CYP3A酶作用相反，银杏黄酮类成分对CYP3A酶的活性呈现出抑制作用，这是以后的实验过程和临床用药中需要严格注意的问题。槲皮素和山柰酚可以引起大鼠和人肝微粒体CYP1A1、CYP1A2、CYP3A4等活性降低。
2.萜内酯的药代动力学
在银杏萜内酯的I相代谢过程中，不同内酯对CYP450酶类的影响表现为组织特异性，不同的化合物对其影响不尽相同。银杏内酯A能诱导CYP3A23的表达，银杏内酯A、B对CYP3A4均有转录无诱导作用；白果内酯能诱导CYP3A4及CYP2B1的表达。银杏萜内酯对CYP450酶系统的作用可能是其药理活性的基础。相比较于I相代谢，与银杏黄酮相似，体外研究显示银杏萜内酯的代谢也以II相代谢为主，银杏内酯A和白果内酯对大鼠中的II相代谢酶（UGT）谷胱甘酞-S-转移酶和硫辛酰胺脱氢酶有显著的诱导作用，而银杏内酯B、C在相同剂量下对其无明显作用。

银杏叶提取物的LD50，静脉给药为(1202.5±141.3)μg/g，相当于生药(7.8±0.9)g/Kg；灌胃给药为(17.9±1.0)g/kg，相当于生药(116.4±6.5)g/kg。给狗注射临床常用量体裁10～40倍的药物1周，出现恶心、呕吐、腹泻、食欲减退等，组织切片发现小肠粘膜分泌亢进，麻醉狗、家兔的肠蠕动增强，注射给药局部血管变硬。
白果酚和银杏毒均有溶血作用，银杏毒对蛙的中枢神经系统有麻醉作用。兔静脉注射银杏毒0.2g/kg，先有短暂的升压作用，而后血压下降，呼吸困难，动物惊厥而死；黄酮醇一般剂量对血液凝血系统无影响，再大剂量可妨碍血凝固。异银杏双黄酮小鼠尾静脉注射的LD50为242mg/kg，急性中毒症状有呼吸急促，匍伏不动，均死于呼吸麻痹。
白果酸有溶血作用。银杏的黄酮类化合物用治疗量的100～1000倍时，对豚鼠能引起血压中等强度降低，呼吸加快，心率减慢。

银杏及其单体成分槲皮素、山柰酚及异鼠李素等黄酮类成分对CYP3A4、CYP2C9、CYP2B6等具有抑制作用，而其单体成分银杏内酯A、B及白果内酯等内酯类成分对CYP1A2、CYP2B1/2、CYP3A2、CYP2C19、UGT1A1等又具有诱导作用，且为P－糖蛋白底物，与药物合用易引发药物相互作用，且作用复杂，因此需引起广泛重视。
近年来不断有个别病例因服用银杏叶制剂或与其它抗凝药物配伍用造成出血的报道。银杏叶提取物抑制PAF而导致出血，其中银杏内酯B被认为是抑制PAF的最重要成分。但目前还没有相应的对照研究。目前市售银杏叶产品的成分和量差异较大。银杏内酯B与出血的相关剂量以及具体量仍未知。而且产品中还可能有其它成分能够导致出血。因此，对这方面的研究还有待进一步深入。所以就目前的研究结果看，应将银杏叶提取物制剂引起出血的病例向医师进行通报，引起足够的重视。并尽量避免银杏叶提取的制剂与阿司匹林、华法林等抗凝药物。

1、食品及保健品行业
银杏叶中黄酮类物质具有抗氧化性，可作为抗氧化剂添加于油脂及糕点中，其总黄酮多具黄色，且溶解性宽，既有水溶性，又有脂溶性，故总黄酮可起着色剂作用。银杏叶加工成超微粉末加于食品中。将银杏叶超微粉碎，按5%～10%添加于糕点、饼干、面条、糖果、冰淇淋中，即可加工成具有保健作用的银杏叶食品。
银杏叶提取物在加拿大作为食品添加剂，在德国和法国已批准为非处方药，银杏叶载入美国药典(24版)，银杏叶提取物在美国可用作饮食补充剂。 国际上的银杏制品已达30多种，主要剂型包括:银杏叶片、银杏口服液、银杏内酯注射液、银杏达莫注射液、银杏酮酯滴丸、复方银杏叶颗粒、银杏叶浸膏等。2009年至2011年间，银杏叶制剂的销售额及DDDs排序稳居心血管常用中药的前三位。
银杏叶中含有少量原花色素和漆酚酸类，对人体尚有一定毒性，将银杏叶作为原料加工食品时要经特殊处理，以降低原花色素和漆酚酸含量。但在目前使用的剂量范围内，没有任何急性和慢性毒性，无致畸作用。卫生部已于1992年批准银杏叶提取物作为新的食品添加剂。近年来，银杏叶总黄酮已广泛应用于食品工业中，银杏叶的研究开发具有广阔的前景。
2、日化行业
银杏叶提取物和皮肤吸收促进剂相结合的组成物也能防止在外用软膏和贴敷剂中所用粘合剂引起的刺激性，可以是乳剂，软膏，霜剂，溶胶和膏药带剂等。现市场上含有GBE的护肤品主要有抗衰老洁面乳、沐浴液、唇膏、眼霜等。 GBE还可用于生产生发、护发产品中。 陈妍等甚至将银杏叶提取物添加在牙膏中，根据其研究，具有一定的防龋效果。