小鼠小肠上皮细胞

小肠上皮细胞(intestineepitheliumcells，小肠上皮细胞)是吸收营养物质的专职细胞，小肠上皮细胞的体外培养对于研究肠道微生态营养，细胞间的信号转导以及隐窝-绒毛系统中各种细胞增殖和分化机制等方面具有重要意义。 无菌条件下用含抗生素的PBS(或无血清DMEM)清洗小肠数次，清洗液中的抗生素为培养液中的2～3倍。将肠管剪成小于1mm3的碎片，再转移至50mL的离心管中，加无血清DMEM清洗，用移液管反复吹打，4℃，1000r离心3min。如上反复清洗组织块，直至上清液澄清。用5%FBS-DMEM悬浮组织块并取适量种植于培养皿或培养瓶中。培养数天后换液，继续培养。 (1)刮除法：将培养瓶放在光学显微镜下观察，用标记笔勾画出上皮细胞集落。在超净台上，用橡胶或玻璃刮子(可用灭过菌的枪头)将成纤维细胞区域刮除。用PBS洗涤培养物，洗去刮下来的细胞。再用胰蛋白酶消化上皮细胞，并用新鲜的培养液重新悬浮，转移至新的培养瓶继续培养。经常观察培养物，必要时，可以重复上述的刮除处理过程，直至显微镜下观察时，视野中大部分为上皮细胞。
(2)相差消化和相差贴壁法：用PBS洗涤细胞，加入0.05%的胰蛋白酶-EDTA消化1～2min，轻轻拍打培养瓶，再将消化液吸去。再加入0.05%的上述酶溶液37℃消化2～3min，加入5%FBS-DMEM吹打，再将细胞悬液移入新的培养瓶(或培养板)继续培养。