PIK-III

VPS34酶活性对于哺乳动物细胞中LC3的脂化是十分必要的。PIK-III在哺乳动物细胞中是一种强力的细胞自噬以及LC3脂化的抑制剂。在H4细胞中，当自噬反应被mTOR抑制剂AZD8055诱导时，PIK-III可抑制自溶酶体的形成、在基础水平上提高LC3的胞质信号。在CCCP-诱导的线粒体自噬模型中，PIK-III抑制线粒体的清除。在H4和PSN1细胞中，PIK-III的处理导致LC3-I水平的上升。在Panc10.05细胞中，PIK-III同时升高LC3-II和LC3-I的水平。

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实施例10a-10v合成4'-(环丙基甲基)-N-吡啶-4-基-4,5'-联嘧啶-2,2'-二胺的一般方法。制备4'-(环丙基甲基)-N-吡啶-4-基-[4,5']联嘧啶基-2,2'-二胺（10a）：向(3Z)-1-环丙基-4-(二甲基氨基)-3-[2-(吡啶-4-基氨基)嘧啶-4-基]丁-3-烯-2-酮（9）（80 mg，0.247 mmol）的DMF（2.061 mL）溶液中加入盐酸胍（35.3 mg，0.371 mmol）和碳酸钾（103 mg，0.742 mmol），将反应混合物在60℃下加热4小时。粗产物通过反相HPLC [30-90%有机相经15分钟]纯化，随后使用Biotage硅胶色谱[10 g SNAP柱，100% DCM至12% MeOH/DCM]进一步纯化，得到目标产物为白色固体（24.72 mg，31.3%收率）。1H NMR（400 MHz, MeOD）δ ppm 0.01-0.14（m, 2H）, 0.39（q, J = 6.06 Hz, 2H）, 0.94-1.10（m, 1H）, 2.87（d, J = 7.07 Hz, 2H）, 7.10（d, J = 5.05 Hz, 1H）, 7.83（d, J = 6.57 Hz, 2H）, 8.30（d, J = 6.57 Hz, 2H）, 8.41（s, 1H）, 8.57（d, J = 5.05 Hz, 1H）。HRMS（ES+）C17H17N7H+ [MH+]的计算值：320.1624；实测值：320.1636。UV-LC：在254/214 nm下100% UV纯度；tR = 4.67分钟，总运行时间7.75分钟。

参考文献：

[1] Patent: WO2012/85815, 2012, A1. Location in patent: Page/Page column 61

[2] ACS Medicinal Chemistry Letters, 2016, vol. 7, # 1, p. 72 - 76