PF-06409577

PF-06409577是具有口服活性的AMPK激活剂，在TR-FRET实验中，对AMPK α1β1γ1的EC50为7 nM。在patchBclamp实验中，100μM的PF-06409577对hERG没有可观测到的抑制作用，对主要的人源细胞色素P450亚型的微粒体活性也没有抑制活性（IC50 > 100 μM）。

Target	Value
AMPK α2β1γ1 ()	6.8 nM(EC50)
AMPK α1β1γ1 ()	7 nM(EC50)

PF-06409577可激活AMPK的亚型α1β1γ1和α2β1γ1，EC50分别为7 nM和6.8 nM。其对α1β2γ1/α2β2γ1/α2β2γ3亚型的活性非常微弱，EC50大于4000 nM。

在大鼠、狗、猴子、人类中，PF-06409577与血浆蛋白结合率高。静脉注射后，在大鼠、狗、猴子中，PF-06409577具有中等的血浆清除率（CLp），分别为22.6 mL/min/kg、12.9 mL/min/kg、8.57 mL/min/kg，分配容积稳定（0.846-3.15 L/kg）。口服PF-06409577（悬浮于0.5% methylcellulose）后，在大鼠、狗、猴子体内迅速被吸收，其口服生物利用度分别为15%, 100% 和 59%。在大鼠中，PF-06409577在肠道的首关代谢中的醛糖酸化反应程度比在其他临床前物种和人类中高。

向圆底烧瓶中加入6-氯-5-[4-(1-羟基环丁基)苯基]-1H-吲哚-3-甲酸甲酯（131 g，368 mmol）、甲醇（2.20 L）和氢氧化钠水溶液（90.2 g，2.21 mol，溶于740 mL水），于70℃搅拌反应18小时。反应完成后，将混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤，滤液浓缩至原体积的约30%，此时未观察到沉淀形成。加入水（700 mL）后，用甲基叔丁基醚（MTBE，3×250 mL）洗涤澄清的棕褐色溶液，弃去有机层。在18~25℃下，向搅拌的水相（总体积约1800 mL）中滴加38%盐酸（200 mL）至pH值约为2-3，随后一次性加入乙酸乙酯（250 mL）。加入乙酸乙酯后，开始有固体析出。在室温下，通过加料漏斗向搅拌的非均相混合物中缓慢加入庚烷（250 mL），继续搅拌4小时。过滤收集固体，依次用水和乙酸乙酯-庚烷混合液（1:1）洗涤，室温下滤干后，于50℃真空干燥，得到浅黄色固体。将该固体溶于四氢呋喃（630 mL），于65℃（内温）搅拌4小时，然后通过滴液漏斗缓慢加入乙酸乙酯（630 mL），所得浆液在室温下缓慢冷却过夜。过滤固体，用四氢呋喃-乙酸乙酯混合液（1:1）洗涤，50℃真空干燥，得到107.0 g产物。浓缩母液，残余物用丙酮洗涤，过滤干燥后得到另外12.5 g产物。将所得固体溶于含0.3 mL 1M NaOH水溶液的乙醇（800 mL）中，于55-60℃下通过加料漏斗缓慢加入水（800 mL），加水后开始有沉淀生成。悬浮液于60℃搅拌2小时，随后在40℃下搅拌24小时，最后在室温下搅拌40小时。过滤固体，用乙醇-水混合液（1:1）洗涤，50℃真空干燥，得到6-氯-5-(4-(1-羟基环丁基)苯基)-1H-吲哚-3-羧酸，为灰白色结晶固体（72.4 g，收率58%）。将母液浓缩至原体积的约30%，析出沉淀，过滤并真空干燥，得到另一批产物（14.5 g，收率12%）。总收率为70%。质谱（ES-）：m/z 340.3（[M-H]-）。1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：12.12（s，1H），11.95（br.s，1H），8.09（d，1H），7.96（s，1H），7.65（s，1H），7.58（d，2H），7.42（d，2H），5.53（s，1H），2.48-2.42（m，2H），2.32（m，2H），1.96（tq，1H），1.62-1.79（m，1H）。

参考文献：

[1] Organic Process Research and Development, 2018, vol. 22, # 6, p. 681 - 696

[2] Patent: US2013/267493, 2013, A1. Location in patent: Paragraph 0696; 0703

[3] Journal of Medicinal Chemistry, 2016, vol. 59, # 17, p. 8068 - 8081

[4] Journal of Medicinal Chemistry, 2018, vol. 61, # 6, p. 2372 - 2383