人胚肺成纤维细胞

人胚肺成纤维细胞来自14周龄男性胎儿的正常肺组织，为有限细胞系该细胞，老化前能传代42到46次群体倍增。它是正常二倍体细胞系，46，XY核型。模式染色体数为46，概率为70%。

1）准备MEM培养基；北美胎牛血清，10%；PS 1%。

2）人胚肺成纤维细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）人胚肺成纤维细胞冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

将含有1mL人胚肺成纤维细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查人胚肺成纤维细胞密度。 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗人胚肺成纤维细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2ml完全培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。

4.将人胚肺成纤维细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

人胚肺成纤维细胞可以用于P物质对人胚肺成纤维细胞作用及其机制的研究。