基本属性 概述诱导原理IPTG的优点实验材料的准备实验方案 MSDS 用途与合成方法 异丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷 价格(试剂级) 供应商 新闻专题 供应信息 相关产品
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异丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷

基本属性 概述诱导原理IPTG的优点实验材料的准备实验方案 MSDS 用途与合成方法 异丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷 价格(试剂级) 供应商 新闻专题 供应信息 相关产品
异丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷
异丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷 性质
  • 熔点 105 °C
  • 比旋光度 -31 º (c=1, water)
  • 沸点 350.9°C (rough estimate)
  • 密度 1.3329 (rough estimate)
  • 折射率 1.5060 (estimate)
  • 储存条件 −20°C
  • 形态Crystalline Powder
  • 颜色White
  • 水溶解性 soluble
  • Merck 14,5082
  • BRN 4631
  • 稳定性Stable. Incompatible with strong oxidizing agents.
  • InChIKeyBPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N
  • CAS 数据库367-93-1(CAS DataBase Reference)
  • EPA化学物质信息.beta.-D-Galactopyranoside, 1-methylethyl 1-thio-(367-93-1)
异丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷 用途与合成方法
  • 概述异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一种作用极强的诱导剂,不被细菌代谢而十分稳定,因此被实验室广泛应用。IPTG 常用于需要诱导 β-半乳糖苷酶活性的克隆实验。它常与 X-Gal 或 Bluo-Gal 结合使用,用于重组细菌菌落的蓝白筛选,这些菌落可以诱导 lac 操纵子在大肠杆菌中的表达。IPTG 与 lacI 阻遏蛋白结合并改变其构象而发挥作用,防止 β-半乳糖苷酶编码基因 lacZ 的抑制。
  • 诱导原理E.coli的乳糖操纵子(元)含Z、Y及A三个结构基因,分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶,此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节 基因I。I基因编码一种阻遏蛋白,后者与O序列结合,使操纵子(元)受阻遏而处于关闭状态。在启动序列P上游还有一个分解(代谢)物基因激 活蛋白(CAP)结合位点。由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区,三个酶的编码基因即由同一调控区调节,实现基因产物的协调表达 。
    在没有乳糖存在时,lac操纵子(元)处于阻遏状态。此时,I序列在PI启动序列操纵下表达的Lac阻遏蛋白与O序列结合,阻碍RNA聚合酶与P序列结 合,抑制转录起动。当有乳糖存在时,lac操纵子(元)即可被诱导。在这个操纵子(元)体系中,真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞,经β-半乳糖苷酶催化,转变为异乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白,使蛋白构象变化,导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录。异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的作用与异乳糖相同,是一 种作用极强的诱导剂,不被细菌代谢而十分稳定,因此被实验室广泛应用。
  • IPTG的优点1.能诱导酶的合成,但又不被分解的分子,称为安慰诱导物。由于乳糖虽可诱导酶的合成,但又随之分解,产生很多复杂的动力学问题,因此人们常用安慰诱导物来进行各种实验。
    2.IPTG不被菌体代谢,为乳糖类似物,一旦进入细胞就会产生持续长久的诱导效果,所以IPTG的诱导效率高,往往只需要很少量(1mmol/L)即可达到理想诱导效果。由于IPTG不被代谢,在胞内专一诱导外源蛋白的表达。不受细胞代谢的影响,诱导效果持续稳定。乳糖有双效作用,既能做为诱导剂异乳糖的前体物质,又可以做碳源,在诱导过程中,很不稳定,IPTG因其优异的稳定性决定了它适合做实验研究用。
    3.IPTG能在缺乏lacY基因下而有效地被抄送。
    4.半乳糖苷键中用硫代替了氧,失去了水解活性,但硫代半乳糖苷和同源的氧代化合物与酶位点的亲和力相同,IPTG虽不为β–半乳糖苷酶所识别,但它是lac基因簇十分有效的诱导物。
    使用方法:首先把IPTG配制成23.83 mg/ml(100 mM)的水溶液,并进行过滤除菌后保存。然后在100 ml的琼脂培养基中,加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal(20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 μl的Amp(100 mg/ml),制作成IPTG、X-Gal、Amp平板���养基。当dna片段插入至pUC系列载体(或其他带有lacZ、Amp基因载体),然后转化至lacZ缺失细胞中后,涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培养基,可根据长出菌体的蓝白色,而方便地挑选出基因重组体(白色为具有DNA插入片段的基因重组体)。
  • 实验材料的准备1、诱导表达材料:
    ( 1 ) LB (Luria—Bertani))培养基:
    酵母膏 (Yeast extract) 5g 蛋白胨 (Peptone) 10g
    NaCl 10g 琼脂 (Agar) 1-2%
    蒸馏水 (Distilled water) 1000ml pH 7.0
    适用范围:大肠杆菌
    ( 2 ) IPTG 贮备液:
    2 g IPTG溶于10 mL 蒸馏水中,0 . 22 μm 滤膜过滤除菌,分装成1 mL /份,-20 ℃ 保存.
    ( 3 ) l× 凝胶电泳加样缓冲液:
    50 mmol / L Tris -CI ( pH 6 . 8 )
    50 mmol / L DTT
    2 % SDS (电泳级)
    0.1 % 溴酚蓝
    10 % 甘油
    2、大肠杆菌包涵体的分离与蛋白纯化材料:
    1 )酶溶法
    (1)裂解缓冲液:
    50 mmol / L Tris-CI ( pH 8 . 0 )
    1 mmol / L EDTA
    100 mmol / LNaCI
    (2)50 mmol / L 苯甲基磺酰氟(PMSF ).
    (3)10 mg / mL 溶菌酶.
    (4)脱氧胆酸.
    (5)1 mg / mL DNase I.
    2 )超声破碎法
    ( 1 ) TE 缓冲液.
    ( 2 ) 2×SDS -PAGE 凝胶电泳加样缓冲液:
    100 mmol / L Tris-HCI ( pH 8 . 0 )
    100 mmol / L DTT
    4 %SDS
    0.2 % 溴酚蓝
    20 % 甘油
  • 实验方案1、外源基因的诱导表达:
    (1)用适当的限制性内切核酸酶消化载体DNA 和目的基因.
    ( 2 )按连接步骤连接目的基因和载体,并转化到相应的宿主菌.
    ( 3 )筛选出含重组子的转化菌落,提取质粒DNA 作限制性内切核酸酶图谱,DNA 序列测定,
    确定无误后进行下一步.
    ( 4 )如果表达载体的原核启动子为PL 启动子,则在30 -32 ℃ 培养数小时,使培养液的OD600达0.4-0.6 ,迅速使温度升至42 ℃ 继续培养3 -5h ;如果表达载体的原核启动子为tac 等,则37 ℃培养细菌数小时达到对数生长期后加IPTG 至终浓度为1 mmol / L.继续培养3 -5h .
    ( 5 )取上述培养液1 mL , 1000g 离心,1 min ,沉淀,加100 μL 聚丙烯酰胺凝胶电泳上样缓冲液后,作SDS -PAGE 检测.
    2、大肠杆菌包涵体的分离与蛋白质纯化:
    细菌的裂解
    常用方法有:① 高温珠磨法;② 高压匀浆;③ 超声破碎法;④ 酶溶法;⑤ 化学渗透等.前三种方法属机械破碎法,并且方法① 、② 已在工业生产中得到应用,后三种方法在实验室研究中应用较为广泛.下面介绍酶溶法和超声破碎法的实验步骤.
    酶溶法.常用的溶解酶有溶菌酶;β-1,3 -葡聚糖酶;β-1,6 -葡聚糖酶;蛋白酶;壳多糖酶;糖昔酶等.溶菌酶主要对细菌类有作用,而其他几种酶对酵母作用显著.主要步骤为:
    4 ℃ ,5000rpm 离心,15 min ,收集诱导表达的细菌培养液(100 mL ).弃上清,约每克湿菌加3 mL 裂解缓冲液,悬浮沉淀.
  • 用途 常用分子生物学试剂,常用于蓝白斑筛选及IPTG诱导的细菌内的蛋白表达等
  • 用途 是β-半乳糖苷酶和β-半乳糖透酶的诱导剂,不被β-半乳糖苷水解,是硫代半乳糖转酰酶的底物
  • 用途 IPTG 常用于需要诱导 β-半乳糖苷酶活性的克隆实验。它常与 X-Gal 或 Bluo-Gal 结合使用,用于重组细菌菌落的蓝白筛选,这些菌落可以诱导 lac 操纵子在大肠杆菌中的表达。IPTG 与 lacI 阻遏蛋白结合并改变其构象而发挥作用,防止 β-半乳糖苷酶编码基因 lacZ 的抑制。
安全信息
MSDS信息
  • 语言:English提供商:IPTG
  • 语言:English提供商:SigmaAldrich
  • 语言:English提供商:ACROS
  • 语言:Chinese提供商:ALFA
  • 语言:English提供商:ALFA
  • 更新日期2018-06-12
  • 产品编号I0328
  • 产品名称异丙基1-硫代-β-D-半乳糖吡喃糖苷
  • CAS编号367-93-1
  • 包装1G
  • 价格375
  •  
  • 更新日期2018-06-12
  • 产品编号I0328
  • 产品名称异丙基1-硫代-β-D-半乳糖吡喃糖苷
  • CAS编号367-93-1
  • 包装5G
  • 价格990
异丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷供应商更多
  • 公司名称:上海吉至生化科技有限公司 黄金产品
  • 联系电话:400-900-4166
  • 产品介绍: 中文名称:异丙基-β-D-硫代半乳糖苷
    英文名称:Isopropyl β-D-thiogalactoside (IPTG)
    CAS:367-93-1
    纯度:98% 包装信息:5g;25g;100g;500g 备注:I37070
  •  
  • 公司名称:苏州亚科科技股份有限公司 黄金产品
  • 联系电话:0512- 81667796
  • 产品介绍: 中文名称:异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)
    英文名称:Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside
    纯度:98.0-101.0% 包装信息:100g;500g;1KG;10KG;25KG
  •  
  • 公司名称:阿法埃莎(中国)化学有限公司 黄金产品
  • 联系电话:400-610-6006; 021-67582000
  • 产品介绍: 中文名称:异丙基-β-D-硫代半乳糖苷, 不含二氧六环, 99%
    英文名称:Isopropyl-^b-D-thiogalactoside, dioxane-free, 99%
    CAS:367-93-1
    包装信息:1g 备注:B21149
  •  
  • 公司名称:南京探求生物技术有限公司 黄金产品
  • 联系电话:+86-25-85860978,81682922,13515111588,18905151602
  • 产品介绍: 中文名称:异丙基-β-D-硫代半乳糖苷
    英文名称:IPTG
    CAS:367-93-1
    纯度:>99.0% 包装信息:100G,500G,1KG,5KG,25KG 备注:生化级
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  • 公司名称:北京诺其雅盛生物科技有限公司 黄金产品
  • 联系电话:4000-819-385 010-62329685 13718666987
  • 产品介绍: 中文名称:异丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷
    英文名称:Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside
    CAS:367-93-1
    纯度:>=98.0% 包装信息:5G,10G,100G,500G,1KG 备注:超纯,99%,有害品 1克/45
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