NCI-H69人小细胞肺癌贴壁细胞系

NCI-H69细胞源自一位55岁患有小细胞肺癌的白人男性的胸腔积液转移病灶。NCI-H69细胞为非整倍体，在软琼脂中可以形成集落，并保留小细胞癌的形态和超微结构以及APUD细胞特征。NCI-H69细胞聚集生长，因此细胞计数不准确，可适应在摇瓶或旋转瓶系统中生长。NCI-H69细胞角蛋白染色阳性。NCI-H69细胞扩增了N-myc基因，mRNA和蛋白质均表达；C-myc mRNA低水平表达，但不表达蛋白质。NCI-H69细胞表达c-myb、v-fes、v-fms、c-raf 1、Ha-ras、Ki-ras和N-ras mRNA。NCI-H69细胞可以用于3D细胞培养和癌症研究。 1） 来源：55岁 白人 男性 肺
2） 形态：多细胞聚集体 悬浮生长 淋巴母细胞样(卵圆形或多角形) 肺癌细胞

①将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4~6mL完全培养基的离心管中混合均匀，1000rpm/min离心3~5min，弃去上清液。加入1mL完全培养基重悬细胞后，均匀铺于含6~8mL完全培养基的培养瓶（或皿）中，置于37℃恒温细胞培养箱中过夜培养。第二天显微镜下观察细胞生长情况。

②NCI-H69人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达70%-90%，即可进行传代培养。

1.混匀细胞，收集细胞培养基，900rpm离心3-5min，弃上清；2.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；3.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） 人源（Homo sapiens） 肺（Lung） 悬浮生长（Suspension） 55岁（55 years）

①收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。

②加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

③将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

肿瘤细胞 癌症（Carcinoma）

①细胞冻存时，步骤同细胞传代的①~④，细胞计数后，加入配制好的细胞冻存液，重悬细胞，按照1×106~1×107个细胞/mL分配到一个冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

②将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80℃冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。