NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞)
NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞) 用途与合成方法
NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞)来源于肺灌洗时的正常大鼠肺泡巨噬细胞。细胞在gerbil肺细胞连续培养液存在下培养了大约8-9个月。随后,不再需要外源生长因子。通过有限稀释法从单个细胞克隆并亚克隆NR8383细胞,并三次用软琼脂亚克隆。细胞表现出巨噬细胞的特性,吞噬酵母多糖和铜绿,非特异性脂酶活性,Fc受体,氧化降解;分泌IL-1,TNFbeta和IL-6,可重复地响应外源生长因子。NR8383细胞响应博莱霉素,分泌TGFbeta前体。在博莱霉素刺激下,TGFbetamRNA表达也上升。细胞对内毒素敏感。1-10ng/mL的LPS水平抑制增生达50%。即使达到0.001mg/mL的水平,LPS抑制还是无毒且在后续过程中可逆的。NR8383细胞株提供了高响应的肺泡巨噬细胞的均一来源,可以用于体外研究巨响细胞相关活性,此细胞悬浮-贴壁混合生长。
NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞)
肺;巨噬细胞;肺泡 NR8383来源于肺灌洗时的正常大鼠肺泡巨噬细胞。细胞在gerbil肺细胞连续培养液存在下培养了大约8-9个月。随后,不再需要外源生长因子。通过有限稀释法从单个细胞克隆并亚克隆NR8383细胞,并三次用软琼脂亚克隆。细胞表现出巨噬细胞的特性,吞噬酵母多糖和铜绿,非特异性脂酶活性,Fc受体,氧化降解;分泌IL-1, TNF beta和IL-6,可重复地响应外源生长因子。NR8383细胞响应博莱霉素,分泌TGF beta前体。在博莱霉素刺激下,TGF beta mRNA表达也上升。细胞对内毒素敏感。1-10ng/mL的LPS水平抑制增生达50%。 即使达到0.001mg/mL的水平,LPS抑制还是无毒且在后续过程中可逆的。 NR8383细胞株提供了高响应的肺泡巨噬细胞的均一来源,可以用于体外研究巨响细胞相关活性。1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
收集细胞,1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。也可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,进行离心收集,1000RPM条件下离心8-10分钟,去除上清,按冻存数量加入血清及DMSO,冻存比例为90%FBS+10%DMSO。
贴壁和悬浮混合;巨噬细胞 NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞)“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间,与细胞世代或倍增不同。在一代中,细胞培增3~6次。细胞传代后,一般经过三个阶段:游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度,即细胞群的分裂相数/100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2%~0.5%,肿瘤细胞可达3~5%。接种2~3天分裂增殖旺盛,是活力zui好时期,称指数增生期(对数生长期),适宜进行各种试验。