NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞)的应用

背景^[1-3]

NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞)来源于肺灌洗时的正常大鼠肺泡巨噬细胞。细胞在gerbil肺细胞连续培养液存在下培养了大约8-9个月。随后，不再需要外源生长因子。通过有限稀释法从单个细胞克隆并亚克隆NR8383细胞，并三次用软琼脂亚克隆。细胞表现出巨噬细胞的特性，吞噬酵母多糖和铜绿，非特异性脂酶活性，Fc受体，氧化降解；分泌IL-1,TNFbeta和IL-6，可重复地响应外源生Chemicalbook长因子。NR8383细胞响应博莱霉素，分泌TGFbeta前体。在博莱霉素刺激下，TGFbetamRNA表达也上升。细胞对内毒素敏感。1-10ng/mL的LPS水平抑制增生达50%。即使达到0.001mg/mL的水平，LPS抑制还是无毒且在后续过程中可逆的。NR8383细胞株提供了高响应的肺泡巨噬细胞的均一来源，可以用于体外研究巨响细胞相关活性，此细胞悬浮-贴壁混合生长。

NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞)

培养步骤：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。也可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及DMSO，冻存比例为90%FBS+10%DMSO。

应用^[4][5]

用于纳米二氧化铈对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383、大鼠肺泡上皮细胞RPAEpiC的作用研究

以大鼠肺巨噬细胞NR8383、大鼠肺泡上皮细胞RPAEpi C为研究对象,对纳米氧化铈的生物效应及其毒理学性质进行研究,在细胞水平体外考察纳米氧化铈对生物体产生的生物学效应和毒性作用。

方法：将细胞置于37℃、5%CO2培养箱进行培养,加氧化铈,剂量效应实验:加浓度为5、10、20、50、100mg/ml的20nm Ce O2;尺寸效应实验:加浓度为100mg/ml的35nm、68nm、287nm、1-5mm Ce02;比较实验1:20nm Ce O2、34nm Zn O、24nm Si O2;比较实验2:287nm Ce O2、300nm Nd2O3。阴性对照组（0mg/ml）加入10ml无血清培养液。干预24h后检测细胞存活率、细胞通透性、氧化应激、炎性因子释放、细胞凋亡和周期、吞噬功能。

结果：（1）剂量效应研究:10-100mg/ml细胞存活率随浓度增大而升高,在100mg/ml时存活率最高,纳米氧化铈在本实验浓度区间对细胞没有产生抑制作用。LDH含量都比对照组有明显的升高,各浓度纳米氧化铈均使膜通透性增大,10-50mg/ml时,细胞通透性随剂量增加而增大,100mg/ml作用下膜通透性改变稍比其它剂量小,剂量效应不显著。SOD含量与对照组相比,在10-50mg/ml时,SOD值略有下降,在5、100mg/ml时SOD值升高,表现较低浓度和较高浓度的损伤作用较弱。10-50mg/ml纳米氧化铈作用下NO含量略有下降,NO含量低于对照组,5、100mg/ml时NO含量与对照组相近。6h时,0-5mg/ml作用下促进凋亡,后随着剂量增加,抑制凋亡作用增加;12h时,0-10mg/ml随剂量增加逐渐促进凋亡,后随着剂量增加,抑制凋亡作用增加;24h时,0-10mg/ml随剂量增加逐渐促进凋亡,后随着剂量增加,促进凋亡作用减弱,最后抑制凋亡,并抑制凋亡逐渐增加。

（2）尺寸效应研究:纳米组氧化铈增加细胞存活率,1-5mm组氧化铈表现出抑制细胞增殖;各粒径组均使LDH含量增高,表明致膜通透性均增大,1-5mm组使膜通透性改变。纳米组氧化铈均使NO降低,1-5mm组NO含量升高。表现出纳米组氧化铈无明显细胞毒性,微米组氧化铈可能有细胞毒性。

（3）三种纳米氧化物的比较研究:纳米氧化铈使NO含量下降,对细胞没有毒性作用。纳米氧化硅NO含量升高,有弱毒性作用。纳米氧化锌NO升高,有明显毒性作用。结论纳米氧化铈作用于大鼠肺泡上皮细胞RPAEpi C和大鼠肺泡巨噬细胞NR8383 24h,总体剂量效应不明显:在所选浓度范围内作用下,均没有表现出明显的细胞损伤作用,均能被细胞摄入,5和100mg/ml对细胞的促进作用较其它浓度轻。

参考文献

[1]Forming-free bipolar resistive switching in nonstoichiometric ceria films[J].Muhammad Ismail,Chun-Yang Huang,Debashis Panda,Chung-Jung Hung,Tsung-Ling Tsai,Jheng-Hong Jieng,Chun-An Lin,Umesh Chand,Anwar Manzoor Rana,Ejaz Ahmed,Ijaz Talib,Muhammad Younus Nadeem,Tseung-Yuen Tseng.Nanoscale Research Letters.2014(1)

[2]Photocurrent response and semiconductor characteristics of Ce-Ce 2 O 3-CeO 2-modified TiO 2 nanotube arrays[J].Yu Tan,Shenghan Zhang,Kexin Liang.Nanoscale Research Letters.2014(1)

[3]Long-term aging of a CeO 2 based nanocomposite used for wood protection[J].Melanie Auffan,Armand Masion,Jerome Labille,Marie-Ange Diot,Wei Liu,Luca Olivi,Olivier Proux,Fabio Ziarelli,Perrine Chaurand,Christophe Geantet,Jean-Yves Bottero,Jerome Rose.Environmental Pollution.2014

[4]Ceria nanocubic-ultrasonication assisted dispersive liquid–liquid microextraction coupled with matrix assisted laser desorption/ionization mass spectrometry for pathogenic bacteria analysis[J].Hani Nasser Abdelhamid,Mukesh L.Bhaisare,Hui-Fen Wu.Talanta.2014

[5]吕丽萍.纳米二氧化铈对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383、大鼠肺泡上皮细胞RPAEpiC的作用研究[D].内蒙古科技大学包头医学院,2015.