4-[5-氯-2-[(1-甲基乙基)氨基]-4-吡啶基]-N-[(1S)-1-(3-氯苯基)-2-羟基乙基]-1H-吡咯-2-甲酰胺

在一个包含b-RAFV600E突变体的A375黑色素瘤细胞中，Ulixertinib降低磷酸化的ERK2 (pERK)水平和下游激酶RSK (pRSK)的磷酸化水平，IC50分别为4.1/0.14 μM。Ulixertinib也会抑制A375细胞增殖，IC50为180 nM。

663611-73-2

869886-90-8

869886-67-9

在步骤4中，首先对干燥且洁净的50L反应烧瓶进行氮气吹扫20分钟以确保无氧环境。随后，向反应器中加入DMF（30.20kg）并启动搅拌。维持反应温度在15-25℃范围内，缓慢加入ASYM-112394（校正后2.76kg），直至固体完全溶解。接着，将反应混合物冷却至-10至-20℃，并在此温度下加入1-羟基苯并三唑水合物（2.10kg）。然后，分五次以约5-10分钟的间隔加入EDCI（2.41kg）。进一步将混合物冷却至-20至-30℃，并加入ASYM-111888（1.96kg）。随后，以3-4kg/h的速率滴加DIEA（1.77kg）。完成加料后，以5-10℃/h的速率升温至15-25℃，并在此温度下维持反应。反应过程中，每隔6-8小时取样，通过HPLC监测ASYM-112394的含量，直至其降至2%以下。反应完成后，将混合物冷却至0-10℃，并用预先冷却至0-10℃的乙酸乙酯（28.80kg）和水（12.80kg）混合溶液进行淬灭。随后，用乙酸乙酯（28.80kg）萃取三次，每次萃取搅拌20-30分钟，静置20-30分钟后分离有机相。合并有机相，用纯净水（12.80kg）洗涤两次，每次搅拌20-30分钟并静置分离。之后，通过在线流体过滤器过滤有机相，并将滤液转移至300L搪玻璃反应器中。用5%乙酸溶液（由乙酸2.24kg和水42.50kg配制）洗涤有机相两次，加入速率为10-20kg/h。接着，用碳酸钠溶液（由碳酸钠9.41kg和水48.00kg配制）洗涤两次，再用氯化钠溶液（由氯化钠16.00kg和水44.80kg配制）洗涤两次。将洗涤后的有机相转移至300L搪玻璃反应器中，加入无水硫酸钠（9.70kg），在15-30℃下搅拌2-4小时。过滤混合物，滤饼用硅胶（7.50kg）预装的nutche过滤器处理，并用乙酸乙酯（14.40kg）洗涤。合并滤液，通过在线流体过滤器转移至72L烧瓶中，在40℃下减压浓缩（压力-0.08MPa）至剩余3-4L。加入MTBE（4.78kg），冷却至0-10℃搅拌结晶。1小时后取样，通过重量分析监测母液重量百分比，直至达到5%或连续样品间变化不超过1%。最后，通过真空过滤收集产物，滤饼在30-40℃下氮气保护干燥至KF≤0.5%，得到3.55kg灰白色固体产物，纯度100%。产物经XRPD分析确认结构，具体峰位和强度见原文表2和表3。

参考文献：

[1] Patent: WO2016/123574, 2016, A1. Location in patent: Paragraph 0233; 0234; 0235; 0236

[2] Patent: WO2016/123581, 2016, A1. Location in patent: Paragraph 146; 0151; 0152; 0153; 0154

[3] Patent: WO2005/113541, 2005, A1. Location in patent: Paragraph 0089