R-406

R406 (free base) 是一种有效的Syk抑制剂，无细胞试验中IC50为41 nM，强效抑制Syk而不能抑制Lyn，对Flt3作用效果低5倍。R406 (free base) 可触发凋亡。Phase 1。

Target	Value
FLT3 ()
Syk (Cell-free assay)	41 nM

R406是ATP竞争性Syk抑制剂，K _i 为30 nM。在不同细胞中R406选择性抑制 Syk依赖的信号通路，EC50为33 nM 到171 nM,比作用于 Syk非依赖性通路效果高很多。 R406作用于多种弥漫性巨大细胞淋巴瘤，抑制细胞增殖，EC50 为0.8 μM 到 8.1 μM。1 μM 或 4 μM R406处理DLBCL细胞系，诱导caspases 9 和3激活, 而不激活caspase 8，导致大部分细胞凋亡。用R406预处理B细胞受体(BCR)交联的对R406 敏感的DLBCLs，完全抑制 SYK525/526磷酸化和BLNK依赖SYK的磷酸化。 R406有效降低MMP-9 mRNA水平，处理24和48小时，比对照组分别降低2.8和4.3倍,并降低RL细胞侵袭能力。

R406有效作用于多种免疫系统紊乱的动物模型。R406口服给药患免疫复合物导致炎症反应的小鼠，显著抑制皮肤反向被动Arthus反应，按1 mg/kg和 5 mg/kg剂量处理, 与对照组相比则抑制分别为72% 和86%。R406按 10 mg/kg 剂量处理用胶原抗体处理的鼠，显著降低炎症和肿胀, 使渐进性关节炎降低到较低水平，且延迟发病，且作用于K/BxN血清转移小鼠模型，降低临床关节炎达 50% 。

步骤B：6-[[5-氟-2-[(3,4,5-三甲氧基苯基)氨基]-4-嘧啶基]氨基]-2,2-二甲基-4H-吡啶并[3,2-b][1,4]恶嗪-3-酮的制备 在氮气保护下，将6-[(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氨基]-2,2-二甲基-4H-吡啶并[3,2-b][1,4]恶嗪-3-酮（步骤A产物，568 kg，1.00 mol当量）与3,4,5-三甲氧基苯胺（402 kg，1.25 mol当量）在N-甲基吡咯烷-2-酮（2835 kg）中混合并搅拌。加入水（11 kg）后，将反应混合物加热至120℃并维持此温度搅拌10小时。反应完成后，将混合物冷却至65℃，用4% w/w氢氧化钠水溶液调节pH至8.5。随后，将浆液进一步冷却至20℃，持续搅拌至少6小时，然后进行过滤。过滤所得固体依次用水（2×1440 kg）和丙酮（2×1140 kg）各洗涤两次，最后在40℃下真空干燥，得到目标化合物6-[[5-氟-2-[(3,4,5-三甲氧基苯基)氨基]-4-嘧啶基]氨基]-2,2-二甲基-2H-吡啶并[3,2-b]-1,4-噁嗪-3(4H)-酮（754 kg，收率91%），为有色固体。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 1.42 (s, 6H), 3.59 (s, 3H), 3.66 (s, 6H), 7.04 (s, 2H), 7.32 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 9.10 (br.s, 1H), 9.14 (br.s, 1H), 11.06 (br.s, 1H). 质谱数据: m/z 471 [MH]+.

参考文献：

[1] Patent: US2015/175639, 2015, A1. Location in patent: Paragraph 0149; 0150; 0151; 0152