链激酶的制备及应用

背景及概述^[1、3]

链激酶是β-溶血性链球菌产生的一种激酶。SK对纤溶酶原的激活作用是间接的。SK先与纤溶酶原结合成复合物，此时纤溶酶原的构型发生改变，活性部位暴露，通过自身催化作用纤溶酶原转变为纤溶酶。后者使血栓发生溶解。本品是从β-溶血性链球菌培养液中制成的一种不具有酶活性的蛋白质，具有促进体内纤维蛋白溶解系统活性的作用，能使纤维蛋白溶酶原激活因子前体物转变为激活因子，后者再使纤维蛋白原转变为有活性的纤维蛋白溶酶，使血栓溶解。其可用于治疗急性心肌梗死、血栓栓塞性疾病，深部静脉栓塞、周围动脉血栓、急性肺栓塞、血管外科手术后、心导管术后的血栓形成、中央视网膜动静脉栓塞等。

制备^[4]

CN94112106.2提供一种用生物高技术制备重组链激酶的方法，使制备过程安全、产品的得率和纯度都很高而成本低。

本发明采用下述技术方案：

(1)从人体口腔分离溶血性链球菌，从培养液中提纯链激酶，测定N末端和C末端5个氨基酸顺序作设计引物的参考。用溶血性链球菌大分子DNA作模板，通过PCR直接扩增链激酶基因，链激酶 基因经核苷酸顺序分析证实后与原核表达载体例如含PL，PR启动子，CIT857基因以及5SRNA终止信号等调控元件的PLY-4质粒 组装成高效表达质粒pSTE-SK-l；

(2)pSTE-SK-1转化大肠杆菌，用温度诱导r-SK基因的表达，SDS-PAGE证实表达产物r-SK分子量为43000，以包涵体形成存在于工程菌内，占菌体蛋白的65％以上，工程菌命名 PSTE-SK-1；

(3)通过发酵技术扩增工程菌，用M9CAA作基础培养液，温度诱导前后用LB、葡萄糖、稀有元素溶液等补液料，发酵参数为温度30-42℃，氧溶量为50-80％，pH6-8，发酵后用高压破碎细菌，离心收集包涵体，包涵体经缓冲液洗涤，盐酸胍溶解，和r-SK的复性后，再用凝胶过滤，离子交换二步法纯化产品。

药物相互作用^[2]

与蛋白沉淀剂、生物碱、消毒灭菌剂配伍时，使其活力降低;与抗凝剂如肝素或抗血小板药物阿斯匹林合用，有增加出血的危险。

应用^[5-6]

CN201811335009.2公开了一种病理分析前的生物组织复合脱水处理试剂，配料：松油醇3％-25％、甘油5％-20％、正丁醇18％-60％、叔丁醇10％-85％、乙醇18％-88％、丙酮15％-75％、冰醋酸3％-18％、链激酶0.3％-5％、活性助剂5％-15％。与其它脱水处理试剂相比，能加快对组织的保存固定、脱水、透明、浸石蜡等处理，处理后再通过专业技术人系列步骤制成载玻片，在显微镜观察组织的形态变化小，不发生明显的固缩或膨胀；触感接近原始状态，无明显硬化或软化现象,形态保存完整，不易固缩、变形，染色和组织物质保全充分，镜下细胞结构清晰，结构完整，完全可以满足病理组织学对样本HE染色诊断、特殊染色诊断、免疫组化标记诊断、分子分析诊断等准确诊断要求。     

CN200610029746.0公开了重组链激酶在制备治疗高粘血症药物中的应用，小剂量重组链激酶治疗高粘血症患者后病人的各项病理指症明显改善，临床试验研究结果表明，用重组链激酶治疗高粘血症安全有效，与复方丹参相比起效快，有效率高达95%。因此重组链激酶是治疗高粘血症有效、安全的药物。

主要参考资料

[1] 中国卫生管理辞典

[2] 新编心血管药物手册

[3] 微生物学词典

[4] CN94112106.2 一种制备重组链激酶的方法

[5] CN200610029746.0重组链激酶在制备治疗高粘血症药物中的应用

[6] CN201811335009.2一种病理分析前的生物组织复合脱水处理试剂