羟基甲硝唑的作用

背景及概述^[1]

羟基甲硝唑为甲硝唑的代谢物。甲硝唑属于硝基咪唑类药物，在农业生产中，常作为驱除动物体内寄生虫的药物，加入动物饲料后，造成鸡蛋中甲硝唑的残留。由于甲硝唑对人体有多种毒副作用，尤其是具有潜在致癌性和致遗传性变异作用，而且甲硝唑进入人体后能快速分布于全身，因此对鸡蛋中甲硝唑及其代谢产物残留的检验非常必要。

目前甲硝唑及其代谢物含量测定方法大多采用液相色谱法或液相色谱串联质谱法，国家现行的标准方法中采用固相萃取法、GPC法进行样品预处理或采用内标法定量，过程繁琐，成本较高。

检测^[1]

方法1：鸡蛋中甲硝唑及其代谢物残留量的测定方法：

（1）提取：称取鸡蛋5g，置于离心管中，加入乙腈10mL，加入无水硫酸钠5g，涡旋混匀，10000转/分，离心5min；取上层溶液，加入10mL正己烷，涡旋10000转/分，离心5min，下层溶液待净化。

（2）净化：取上述溶液5mL，加载到PRIMEHLB固相萃取柱（200mg，6cc），保持一秒一滴流速，收集全部流出液。

（3）浓缩：取4.0mL流出液氮气吹干，加入1.0mL0.1%甲酸水-甲醇（体积比50：50）溶解残渣，过0.2μm微孔滤膜，上LCMSMS测试。

（4）测定：采用液相色谱法进行检测，其中色谱柱为AcqμityBEHC（2.1mm*5mm，1.7μm），柱温：35℃，进样量1μl，流动相：溶剂A为0.1%甲酸水，溶剂B为乙腈，梯度洗脱。

（5）测量结果：通过以上步骤测得鸡蛋中甲硝唑及羟基甲硝唑的含量低于0.5μg/kg。

方法2：蜂王浆中硝基咪唑类药物残留量的方法，尤其涉及采用液相色谱-质谱/质谱法测定蜂王浆中羟基甲硝唑、2-甲硝咪唑、羟基二甲硝咪唑、甲硝唑、二甲硝咪唑、洛硝哒唑、氯甲硝咪唑、苯硝咪唑、羟基异丙硝唑和异丙硝唑等硝基咪唑类药物残留量的方法。

同时测定蜂王浆中多种硝基咪唑类药物残留量的检测方法，本发明采用甲醇沉淀蛋白，提取，再采用HLB固相萃取小柱和C18固相萃取小柱净化，采用色谱-质谱/质谱仪测定。本发明具有专属性强、灵敏度高、结果准确的特点，不仅测定硝基咪唑原药还包括一些代谢产物，方法的测定低限10μg/kg，测定低限满足目前国内外对蜂王浆中硝基咪唑类药物残留量的要求。回收率范围为70.7%~105.0%；相对标准偏差小于12.7%。

主要参考资料

[1] CN201811088112.1鸡蛋中甲硝唑及其代谢物残留量的测定方法

[2] CN200910099612.X同时测定蜂王浆中多种硝基咪唑类药物残留量的检测方法