Bolt Bis-Tris Plus Gels的应用

背景^[1-3]

Bolt Bis-Tris Plus Gels是预制聚丙烯酰胺凝胶，可在变性条件下提供各种蛋白质大小的分离。Bolt Bis-Tris Plus凝胶旨在通过中性pH环境提供一致的凝胶性能，限度地减少蛋白质修饰。 

因此，在下游转移和蛋白质印迹分析以及蛋白质完整性至关重要的任何其他技术之前，Bolt凝胶是一个很好的选择。Bolt Bis-Tris Plus凝胶是预制聚丙烯酰胺凝胶，专为在变性条件下分离多种蛋白质而设计。

性能^[4-6]

与NuPAGE Bis-Tris凝胶类似，Bolt Bis-Tris Plus凝胶旨在提供一致的凝胶性能，并提供中性pH环境，通过增加负载能力限度地减少蛋白质修饰。螺栓凝胶是蛋白质印迹转移和分析的理想选择，也是蛋白质完整性至关重要的任何其他技术。使用Bolt Bis-Tris Plus凝胶可获得结果，满足您日常的蛋白质分离需求。Bolt Bis-Tris Plus凝胶适用于变性凝胶电泳应用。

为获得样品制备，请使用含有SDS的缓冲液可以使用MES SDS运行缓冲液运行凝胶以更好地分辨较小的蛋白质（0.3-260kDa）和MOPS SDS运行缓冲液以分辨中等至大尺寸蛋白质（14-260kDa）。Bolt Bis-Tris Plus凝胶具有四种聚丙烯酰胺浓度：8％，10％，12％和4-12％梯度。可以使用Bolt MES SDS或Bolt MOPS SDS运行缓冲液运行凝胶以获得不同的分离范围。Bolt Bis-Tris Plus凝胶由中性pH缓冲（pH 6.4）聚丙烯酰胺凝胶组成，操作pH约为7.0。

使用方便：

使用Bolt MES运行缓冲液，Bolt Bis-Tris Plus凝胶可在约35分钟内使用恒定电压运行。

与Tris-甘氨酸基凝胶相比，Bolt Bis-Tris Plus凝胶具有更清晰的条带，更高的分离度，更长的保质期和更高的结果准确度。此外，Bolt Bis-Tris Plus凝胶具有创新的楔形孔，其样品负载量比其他1.0毫米厚的凝胶高出两倍。楔形井也有较大的开口，使样品装载更容易。Bolt Bis-Tris Plus凝胶在4°C至25°C的温度下保质期至少为16个月。

应用^[7][8]

用于蛋白质凝胶电泳

赤芝(Ganoderma lucidum)、冬虫夏草(Cordyceps sinensis)和羊肚菌(Morchella vulgaris)三种真菌类中药材在我国具有悠久的药用历史。蛋白类成分为三种真菌类中药材主要的化学组成部分,不仅具有良好的生物活性,而且有可能成为质量控制的指标之一,但是一直以来对三种真菌类药材中蛋白成分的研究相对较少。另一方面,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和双向电泳(2-DE)是蛋白质组学的经典技术。

鉴于此,本课题以蛋白质为研究对象,采用SDS-PAGE和2-DE技术对赤芝、冬虫夏草和羊肚菌三种真菌类中药材中的蛋白类成分进行了分析研究。通过SDS-PAGE和IEF-PAGE技术分别分析26个不同产地天然冬虫夏草样品中的蛋白质组分,接着考察了聚乙二醇(PEG)分级法提取虫草蛋白,最后通过2-DE技术进一步分析虫草全蛋白。SDS-PAGE结果显示26个产地虫草样品的蛋白质分子量主要分布在6.5-97.2 kDa之间,含有的蛋白条带数量以及光密度曲线分布基本相似,部分蛋白条带的丰度存在差异;IEF-PAGE结果显示26个虫草样品的等电点主要分布在4-7之间;10%PEG 4000分级提取蛋白结果显示PEG并不能增加虫草蛋白点被检测的数量且实验步骤较为繁琐;2-DE分析全蛋白获得的蛋白凝胶图谱显示26个样品含有的蛋白点个数和丰度存在较大差异,基于匹配的蛋白点以及相对应的表达值进行聚类分析。

羊肚菌蛋白质的凝胶电泳分析(SDS-PAGE、IEF-PAG和2-DE)。SDS-PAGE结果显示TCA/丙酮法提取蛋白所获得的凝胶图谱背景较清晰,7个羊肚菌样品含有的蛋白条带以及光密度曲线基本相似;IEF-PAGE结果显示羊肚菌蛋白基本为酸性蛋白,其等电点主要分布在p I 4-7之间;2-DE结果显示羊肚菌样品含有的蛋白点个数和丰度存在较大差异。这一结果可为羊肚菌种类的鉴别及质量评估提供参考。通过SDS-PAGE和2-DE技术区分和比较了不同产地的赤芝、冬虫夏草和羊肚菌,不仅可为三种真菌中药材的质量控制提供一定参考,也丰富了中药质量控制的指标性成分。

参考文献

[1]Smith,A.(November 1,2005)."History of the Agar Plate".Laboratory News.Retrieved November 3,2012.

[2]Hesse,W.(1992).Translated by Gröschel,D.H.M."Walther and Angelina Hesse–Early Contributors to Bacteriology"(PDF).ASM News.58(8):425–428.Retrieved 22 January 2017.

[3]Lobban,Christopher S.;Wynne,Michael James(1981).The Biology of Seaweeds.University of California Press.pp.734–735.ISBN 9780520045859.

[4]Ewen Callaway(8 December 2015)."Lab staple agar hit by seaweed shortage".Nature News.Retrieved 22 January 2017.

[5]Balfour,Edward.(1885).The cyclopædia of India and of eastern and southern Asia:commercial,industrial and scientific,products of the mineral,vegetable,and animal kingdoms,useful arts and manufactures.B.Quaritch.p.71.

[6]Maeda H,Yamamoto R,Hirao K,Tochikubo O(January 2005)."Effects of agar(kanten)diet on obese patients with impaired glucose tolerance and type 2 diabetes".Diabetes,Obesity,and Metabolism.7(1):40–6.

[7]Pulsed field separation of large supercoiled and open-circular DNAs and its application to bacterial artificial chromosome cloning.Wang M,Lai E.Electrophoresis.1995

[8]李春红.三种真菌类中药材的蛋白质凝胶电泳分析[D].重庆大学,2016.