五胜肽的应用

背景及概述^[1][2]

胜肽（peptide）即小分子的蛋白质，又称多肽或肽，它是由具有一定序列的氨基酸通过酰胺键相连，2个氨基酸组成的叫二胜肽，3个氨基酸组成的叫三胜肽，依次。肽在生物的生长、发育和代谢中起着重要作用。人体内的各种生理进程几乎都是由特定的氨基酸序列组成的多肽或蛋白质调控的。在皮肤自然老化和护理过程中，胜肽起着重要的作用，如细胞增殖、细胞迁移、炎症、血管发生、色素形成以及蛋白合成及调控等。

随着人类对自身皮肤微观结构和机理的进一步认识，多种结构的胜肽被引入皮肤护理中，以达到促进胶原蛋白生成、抗自由基氧化、消炎修复、抗水肿、促进毛发再生、美白、丰胸和减肥等功能。2011年，国外多肽护肤年销售额已超过160亿美元，并以每年30%～40%的速度递增。已有多个国际知名品牌推出了胜肽化妆品，如玉兰油、雅芳、雅诗兰黛、兰蔻、欧莱雅、香奈儿、迪奥以及SK-II等，掀起胜肽美容热潮。

据调查发现，目前被国外著名品牌采用频率最高的几款胜肽为：棕榈酰五肽-3（五胜肽）、乙酰基六肽-3、乙酰基四肽-5、棕榈酰寡肽（棕榈酰三肽-1）、棕榈酰四肽-3和肌肽等，这几种美容胜肽被各个品牌采用的搜索结果均超过500条，足见其应用广泛。

棕榈酰五肽-3的CAS214047-00-4，分子式C₃₉H₇₅N₇O₁₀，分子量802.05400，中文别名棕榈酰五肽-3；五胜肽.阿基瑞林.乙酰六肽-3；美容肽-脂肽；N2-(1-氧代十六烷基)-L-赖氨酰-L-苏氨酰-L-苏氨酰-L-赖氨酰-L-丝氨酸；；密度1.147，沸点1120.1ºCat760mmHg，闪点631.2ºC，折射率1.523，蒸气压mmHgat25°C。

应用^[2-3]

五胜肽只有13个氨基酸，分子量小，容易被吸收。它的一个显著作用是可以促进胶原蛋白增生，间接修复人体口腔粘膜的微损伤。五胜肽的抗衰老作用，可以防止和改善牙龈萎缩。另外，五胜肽可以促进透明质酸和弹力纤维增生，能有效激活玻尿酸合成，这对保持口腔水分，缓解口干至关重要。其应用举例如下：

1）制备一种含五胜肽的生物养护牙膏，包括以下重量百分比的原料：五胜肽0.0001～0.002%，碳酸钙30～50%，甘油25～48%，羧甲基纤维素钠1～3%，月桂醇硫酸酯钠1.8～3.2%，防腐剂（尼泊金酯类一种或多种）0.1～0.8%，薄荷油1～2%，胡萝卜提取液0.01-0.02%；余量为水。这几种成分配合使用，尤其加上活性成分五胜肽和胡萝卜提取液的作用，可以促进胶原蛋白增生，间接修复人体口腔粘膜的微损伤。

五胜肽的抗衰老作用，可以防止和改善牙龈萎缩。另外，五胜肽可以促进透明质酸和弹力纤维增生，能有效激活玻尿酸合成，这对保持口腔水分，缓解口干至关重要。本发明牙膏的适应性广，效果佳，安全无害。

2）制备一种特润精华，其特征在于由下述原料组成：1—4g胎盘素、1—10ml透明质酸、3—10ml甘油、1—4ml神经酰胺、1—3ml五胜肽、2—6ml葡萄籽萃取、2—8ml木瓜萃取液、2—10ml蚕丝蛋白、2—5滴抗菌剂；制备时，先将胎盘素、甘油、神经酰胺混合放置4小时，再将葡萄籽萃取液、木瓜萃取液、蚕丝蛋白添加透明质酸、五胜肽，搅拌均匀，最后将两者的混合物混合，滴3滴抗菌剂，充分摇晃搅拌，装罐密封，放置一天，即可使用；本发明产品高效补水、滋养肌肤、赶走细纹、嫩白润泽，特别适合干燥型肌肤。

制备^[4]

棕榈酰五肽-3（五胜肽）的固相合成

具体步骤如下：

1.Fmoc-Ser(tBu)-WangResin的制备

把1.71gWangResin投入到反应柱中，DMF洗涤一次，抽干；用适量干燥二氯甲烷常温溶涨，N₂吹拂搅拌30min至树脂充分溶胀，抽干液体；DMF洗涤一次，抽干；重蒸DMF洗涤一次，抽干。加入3.07gFmoc-Gly-OH、1.30gHOBt、1.49mlDIC的DMF/DCM(1：1)溶液5ml。反应5min后，加入0.10gDMAP，反应4h。反应结束后，抽干反应液，用DMF洗涤三次抽干，取出少许树脂进行替代度检测。随后加入200ml封闭试剂(AC₂O/吡啶(7：6，V：V))，反应8-16h，DMF洗涤2次；无水甲醇洗两次(10min/次)，真空减压干燥至恒重。测得Fmoc-Ser(tBu)-WangResin的替代度为0.71mmol/g。

2.Matrixyl-WangResin的制备

1）在Fmoc-Ser(tBu)-WangResin反应柱中，加入DCM溶涨20-30min，抽掉。加入DBLK溶液(哌啶/DMF(V/V)=1：4)脱保护2次(5+10min)，两次脱保护之间需加入DMF洗涤1min，抽掉。两次脱完保护抽掉后再用DMF，甲醇，DCM，DMF，各洗涤1次，用玻璃棒挑取少许树脂，茚检，显深紫红色，表明Fmoc已脱，待投料。

2）在脱保护的过程中，称取0.93gFmoc-Lys(Boc)-OH和0.81gHOBt置烧杯中，加入2ml精制DMF溶解，待完全溶解后，将烧杯放入冰浴中冷却2min，然后再加入0.93mlDIC于溶液中活化8min，若出现白色絮状泡沫表明活化已完全，用布氏漏斗将活化液中的白色固体小颗粒滤去，将得到的澄清滤液倒入反应柱中，再加入DMF于反应柱中，调节好N₂，使树脂被均匀吹起，套上干燥管，并要保持在反应过程中无挂壁现象出现，若出现挂壁，用少许精制DMF将壁上的树脂冲到反应液中。室温反应2h，茚检合格后可抽掉反应液继续连接下一个氨基酸。

3.Matrixyl-WangResin的裂解

将干燥至恒重的MatrixylWangResin0.10g置于玻璃烧瓶中，冰浴搅拌下加入TFA-苯甲硫醚-苯甲醚-EDT(体积比95：5：3：2)4ml，反应30min，逐渐升至室温，于室温下反应2h。过滤，用少许TFA洗涤树脂，将滤液倾入40ml无水冰乙醚中，析出白色固体，4000rpm离心4min，弃去上清液，重复2次，真空干燥，得粗肽46.6mg。

4.Matrixyl粗肽的分析鉴定

粗品Matrixyl进行RPHPLC分析，纯化后Matrixyl的HPLC-ESI-MS分析可知其m/z402.3{[M+H]2+}，Matrixyl的分子量为802.05，理论值与实际值相符。

主要参考资料

[1]胜肽在化妆品中的应用和最新进展

[2] CN201710119698.2一种含五胜肽的生物养护牙膏及其生产方法

[3] CN201410730993.8一种特润精华

[4]王小青，赵红玲，高杨，王良友，&尹志峰.(2013).棕榈酰五肽-3的固相合成.承德医学院学报，30(5)，414-415.