依鲁替尼的异构体检测方法

背景及概述^[1][2]

由Pharmacyclics公司和杨森制药（Jassen）共同研制的依鲁替尼（Ibrutinib，商 品名Imbruvica）作为口服的布鲁顿酪氨酸激酶（BTK）抑制剂类首创新药，于2013年2月被 FDA授予突破性治疗药物资格，并分别于2013年11月13日和2014年2月12日批准为MCL和CLL 的治疗药物。

异构体检测方法^[1]

依鲁替尼是单一对映体，控制其原料药中的杂质含量特别是其对映异构体的含量对于降低其不良反应具有重要的意义。

专利CN 104407067A公开了一种对依鲁替尼及其异构体进行HPLC检测的方法，但该方法存在一些弊端，如①运行时间较长，单针运行时间 35min以上；②未列出异构体杂质的计算方法，也未进行方法学验证；③未进行异构体的检 测限和定量限的确定，异构体杂质在依鲁替尼原料药中的百分比（即ee值）也未知。由此可见，现有技术的检测结果并不能真实反应药物中异构体杂质的含量。基于此，CN201710424005.0提供一种依鲁替尼对映异构体检测方法及其质量控制标准。

一种依鲁替尼对映异构体的检测方法，其包括如下步骤：

1）系统适用性试验溶液的制备：以甲醇为溶剂，将依鲁替尼对映异构体对照品配 制成浓度为0.5mg/mL的异构体储备溶液；另取依鲁替尼对照品，按照质量体积比5:1（W/V） 加入所配制的异构体储备溶液，再加甲醇溶解至溶液中依鲁替尼的浓度为0.5mg/mL，作为 系统适用性试验溶液；

2）对映异构体对照品溶液的制备：以甲醇为溶剂，将依鲁替尼对映异构体对照品 配制成浓度为0.25mg/mL的异构体母液；然后精密量取该异构体母液，以甲醇为溶剂，按体 积比1:100进行稀释，将稀释后的溶液作为对映异构体对照品溶液；

3）供试品溶液的制备：精密称取依鲁替尼待测样品，以甲醇为溶剂配制成浓度为 0.5mg/mL的溶液，作为供试品溶液；

4）色谱条件与系统适用性试验：采用菲罗门手性柱（LUX Cellulose-4，规格250×4.6mm）；以正己烷-丙二醇-二乙胺（90:10:0.1，V/V/V）为流动相，流量1.2ml/min；检测波长 为260nm；取步骤1）制备的系统适用性试验溶液进行系统适用性试验，依鲁替尼与依鲁替尼 对映异构体的分离度应>5.0，理论塔板数按依鲁替尼峰计应不低于5000；

5）依鲁替尼对映异构体测定：取步骤2）所制备的对映异构体对照品溶液及步骤3）所制备的供试品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算对 映异构体的含量。

本发明还提供了一种依鲁替尼对映异构体的质量控制标准，其中依鲁替尼对映异构体的含量测定按上述检测方法进行，所测得依鲁替尼对映异构体的含量不得超过0.5％。 若为更加严格的控制产品质量，保证用药安全性，该对映异构体检查的标准可提高为不得过0.1％。

本发明检测方法具有较高的准确度、精密度，耐用性强，可以准确反映依鲁替尼原料药中对映异构体的含量，适合工业上用于依鲁替尼对映异构体的检查及质量控制，可以为质量标准的制定提供合理的依据，以便能够更好的控制和掌握产品质量，并有利于提高临床用药的安全性。

无定型制备^[2]

以乙二醇单甲基醚做良性溶剂制备无定型依鲁替尼

准确称取依鲁替尼3.0g，置于30mL容积的单口圆底烧瓶中，然后向其中加入6mL乙二醇 单甲醚，在45℃下搅拌至溶液澄清。然后另取200mL容积的单口圆底烧瓶，并加入18mL去离 子水和搅拌磁子，维持体系处于45℃，并在搅拌过程中将制备的依鲁替尼乙二醇单甲醚溶 液逐滴滴入搅拌的水中，滴加完毕后继续在45℃下搅拌2h，然后过滤出固体，将滤出的固体加入100mL去离子水中打浆1h，过滤出打浆的固体，并采用去离子水洗涤后，真空干燥固体 至恒重，得到固体依鲁替尼2.55g，收率为85%。PXRD测试图如附图1所示，可见所制备的依鲁替尼为无定型产品。

制剂^[3]

含有依鲁替尼和人血清白蛋白(HSA)的组合物，制备的依鲁替尼和HSA的重量比为约1:200。

在小瓶中，将依鲁替尼(2mg)溶解于甲醇(3.5ml)中，得到澄明的溶液。在圆底烧瓶中，将HSA粉末(400mg)(购买自SeraCare Life Sciences的不含天然脂肪酸的人血清白蛋白，产品代码：HS-455-80，其含有脂肪酸<0.2mg/gm)溶解于8ml水中。在0℃下，在快速搅拌下，将依鲁替尼甲醇溶液缓慢滴加到装有HSA溶液的烧瓶中。添加完成后，得到澄明的溶液。然后，在真空下除去溶液中的甲醇，得到澄明的溶液。用0.22微米水相过滤器过滤澄明的水溶液。将得到的澄明的水溶液冻干过夜，得到白色固体。

主要参考资料

[1] CN201710424005.0 一种依鲁替尼对映异构体的检测方法

[2] CN201710985299.4 一种无定型依鲁替尼的制备方法

[3] CN201780050924.4 依鲁替尼制剂