CNX-774(BTK抑制剂)

背景^[1-7]

CNX-774(BTK抑制剂)是不可逆的，口服有效的高选择性BTK抑制剂，IC50<1 nM。在细胞试验中，以酶的ATP结合位点中Cys-481残基为靶点，CNX-774显示出对BTK有效的抑制活性，其IC50为1-10 nM。

Btk激酶在生化测定中，CNX-774已显示出对Btk的有效抑制，在连续读数测定中IC50<1nM。通过在室温下将重组Btk蛋白与10倍摩尔过量的CNX-774孵育1小时并通过MALDI-TOF MS分析来证实CNX-774与Btk的共价结合。

对应于CNX-774分子量的蛋白质质量的变化证实了CNX-774与Btk的共价键合。用胃蛋白酶消化共价键合的Btk，然后进行MSMS分析，确定了CNX-774与Cys-481的结合。通过使用靶向与CNX-774相同的半胱氨酸残基的生物素化共价探针，在Ramos细胞中证实了CNX-774的细胞效力以及延长的作用持续时间。发现CNX-774在大鼠和人全血中孵育2小时后可提取>90％。这些结果表明CNX-774对预期靶标Btk具有有效的抑制活性，同时在旨在评估对丰富的细胞硫醇和血液蛋白的脱靶反应性的各种测定中实现显着的特异性。

通过使用靶向与CNX-774相同的半胱氨酸残基的生物素化共价探针，在Ramos细胞中证实了CNX-774的细胞效力以及延长的作用持续时间。发现CNX-774在大鼠和人全血中孵育2小时后可提取>90％。这些结果表明CNX-774对预期靶标Btk具有有效的抑制活性，同时在旨在评估对丰富的细胞硫醇和血液蛋白的脱靶反应性的各种测定中实现显着的特异性。

通过使用靶向与CNX-774相同的半胱氨酸残基的生物素化共价探针，在Ramos细胞中证实了CNX-774的细胞效力以及延长的作用持续时间。发现CNX-774在大鼠和人全血中孵育2小时后可提取>90％。这些结果表明CNX-774对预期靶标Btk具有有效的抑制活性，同时在旨在评估对丰富的细胞硫醇和血液蛋白的脱靶反应性的各种测定中实现显着的特异性。

应用^[8][9]

CNX-774(BTK抑制剂)可用于淋巴瘤和白血病临床治疗及研究：

CNX-774是一种靶向BTK的共价抑制剂,为了提高其生物活性,探索共价交联基团对其活性的影响,以及补充CNX-774及其类似物在各个细胞系上的活性数据,设计并合成了一些新的共价交联基团,通过一些简单的化学修饰得到一系列CNX-774新的类似物。

所有的抑制剂在200 nmol/L-1浓度时在IgE MM细胞系上做了MTT试验,发现类似物RA-1和RA-3分别有60%和50%的抑制率,而CNX-774则活性较弱;之后类似物分别在8226 MM、Ramos、HBL-1细胞系作了活性评价,类似物RA-1和RA-3也展现出比CNX-774更好的活性;在HeLa等不含BCR信号通路的细胞系做活性评价,发现RA-1和RA-3展现出类似或者更低的细胞毒性;抑制剂在大鼠血浆、肝微粒体和人肝微体的代谢稳定性做了评估,其中一些抑制剂的代谢稳定性略低于CNX-774。

然后通过分子对接手段辅助BTK抑制剂的筛选,同时可以更好地理解CNX-774的类似物与BTK相互作用的模式。通过以上手段筛选出相对理想的BTK新的共价抑制剂RA-1和RA-3。

参考文献

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