0.25%胰酶溶液(不含EDTA含酚红)

背景及概述^[1][2]

胰酶又名胰醇素、胰液素。白色或淡黄色无定形粉末。系从各种动物胰脏制取的混合物，主要是蛋白酶、脂酶、淀粉酶。溶于水呈微浑溶液。不溶于醇、醚。有引湿性，遇酸、碱及热即丧失活力，水溶液遇酸、热、重金属或单宁酸时产生沉淀。为助消化药，用于缺乏胰液的消化不良症。也用于皮革工业和纺织印染，主要用于酶法脱毛。

将绞碎的猪胰浆经激活、提取、沉淀、脱脂、干燥、粉碎而得。EDTA是钙离子的鳌合剂，在胰酶中加入EDTA的作用是为了增加胰酶的消化作用，尤其适用于比较难于消化的细胞；同时可以减少胰消化时间，以减少酶对细胞的损伤作用。若细胞用胰蛋白酶不易消化，可用胰蛋白酶加EDTA消化，它们组合消化作用强，但消化后需离心将消化也去除，否则EDTA会在后续的培养过程中，将培养液中的钙、镁离子螯合，影响细胞的生长。

0.25%胰酶溶液(不含EDTA含酚红)为细胞培养基，1.不含EDTA含酚红：含酚红，2.5g/L胰酶（1：250）溶于HBSS溶液，不含钙镁。-20℃保存。胰0.25%胰酶溶液(不含EDTA含酚红)含0.25%胰酶，不含EDTA和酚红，溶于无钙镁平衡盐溶液中，经过滤除菌，可以直接用于培养细胞和组织的消化，通常室温消化2分钟左右就消化下大多数贴壁细胞。

0.25%胰酶溶液(不含EDTA含酚红)使用说明：1.贴壁细胞的消化：

a)吸去培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。

b)加入少量胰蛋白酶消化液，盖过细胞即可，室温放置1-2分钟。不同的细胞消化时间有所不同，对于贴壁牢固的细胞可适当延长消化时间。

c)显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除消化液。加入含血清的细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。

d)如果发现消化不足，可加入胰蛋白酶消化液重新消化。

e)如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟，沉淀细胞。

主要参考资料

[1] 简明精细化工大辞典

[2] 花卉词典